番茄灰霉生防菌B21的分子鑒定及其抗菌蛋白的分離純化.pdf

1、該研究以從植物葉片上篩選出的具有強烈抑制番茄灰霉病生長并產生大量頡頏物質的頡頏細菌B21為實驗材料.通過部分田間試驗、B21的分子鑒定、對抗菌蛋白的特性分析和抗菌蛋白的分離純化,主要明確了以下問題:利用B.subtilis B21菌株的培養(yǎng)液進行田間防病試驗結果表明,頡頏細菌B21懸浮液對番茄灰霉病有較好的防治效果,其發(fā)酵液原液、5倍稀釋液和10倍稀釋液三個處理在葉期的防病效果分別為67.21％、63.57%和51.02%,均高于對照藥

2、劑多菌靈500倍液(42.26%),達極顯著水平.其中B21發(fā)酵液5倍稀釋處理的防效與10倍處理的防效差異顯著,而與發(fā)酵原液處理的防效處于同一水平.在果期能顯著降低病果率,B21發(fā)酵液原液、5倍稀釋液和10倍稀釋液三種濃度處理的病果率分別為7.5%、9.6%和13.23%.該實驗在原來研究的基礎上利用PCR技術對菌株B21 16S rDNA序列作全序列分析,序列結果在GeneBank中進行Blast同源序列檢索,再用DNAStar軟件與

3、Bacillus屬的其它種進行同源性分析,結果顯示B21與已報道的B.subtilis16S rDNA序列(登陸號AY172513)有99.93%的相似性,且兩者在系統(tǒng)發(fā)育樹中處于同一個分支.確定B21為B.subtilis的一個菌株.利用飽和硫酸銨鹽析,獲得粗提蛋白.該頡頏蛋白80℃處理30 min后,活性顯著下降,只是保持部分頡頏活性,100℃處理30 min后喪失頡頏活性,表明不耐高溫;對胰蛋白酶和蛋白酶K部分敏感,對鏈霉蛋白酶不