淇河鯽生長激素全長cDNA的克隆、序列分析及真核表達.pdf

1、在我國淡水養(yǎng)殖已有2000多年的歷史，淡水養(yǎng)殖在我們的生活中占有很重要的地位。淇河鯽是產(chǎn)于河南省淇河的自然三倍體雌核發(fā)育鯽魚，以生長快、味道美和效益高等優(yōu)點而久負盛名，具有良好的開發(fā)前景。為了提高其生長速度，縮短養(yǎng)殖周期，為市場提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，促進淇河鯽養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，目前急需研制安全高效的新型魚用生長促進劑來促進生長和保證食品安全。 魚類生長激素是由腦垂體分泌的多肽類激素，參與魚類的生長、發(fā)育、代謝、食欲和滲透壓的調(diào)節(jié)，廣

2、泛應用于魚類內(nèi)分泌學、攝食和食物轉(zhuǎn)化效率、生長等的研究。但是由于天然生長激素難以大量獲得，限制了其功能和應用研究。另一方面外源生長激素在魚體內(nèi)分解消失快，不會在魚體中積累，這一結(jié)果提示，重組生長激素蛋白的應用可能以本原動物來源的為好。 本試驗進行了淇河鯽生長激素基因cDNA的克隆與序列分析，推導出蛋白質(zhì)序列并與其他魚類的生長激素進行了同源性比較和進化系統(tǒng)分析，為從分子水平上了解淇河鯽生長規(guī)律打下基礎。在真核表達實驗中，根據(jù)已取得

3、的淇河鯽生長激素的序列全長，在開放性閱讀框架兩端設計特異引物，用RT-PCR擴增，得到大小為633bp的一個產(chǎn)物，進行測序驗證，完全在前測定序列的開放性閱讀框架內(nèi)。將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5a中進行克隆，用PCR初步篩選出重組子，以EcoRI，SnaBI雙酶切做進一步鑒定后，將重組子命名為PPIC9K-GH，并進行序列測定為下一步實驗提供重組子。重組質(zhì)粒經(jīng)線性化等處理，電擊轉(zhuǎn)化導入畢赤酵母GS115中，經(jīng)MD、G418篩選得到高抗