15439.bl21(de3)重組工程體系的建立和自剪切系統(tǒng)的探索

1、學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機構(gòu)己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻均己在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：石杠書目期：∞f鄉(xiāng)夕ty7，學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文

2、的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)機關(guān)或機構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。(保密論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋：本學(xué)位論文屬于保密論文，密級：!匹鹽保密期限為——年。學(xué)位論文作者簽名：石p俞指導(dǎo)教師簽名：日期：如f占。ry)日期：目錄11菌種和質(zhì)粒1612培養(yǎng)基和緩沖液的配制1813主要工具酶及化學(xué)試劑1814主要儀器設(shè)

3、備及來源1815引物合成與測序182實驗方法1921常規(guī)分子生物學(xué)操作方法1922重組酶表達質(zhì)粒(21，22見第二章第一節(jié))1923利用I—SceI消除卡那霉素抗性片段的方法193結(jié)果1931HA—S—neoS—HA基因敲入的實驗2032基于歸巢內(nèi)切酶I—SceI雙鏈斷裂消除抗性2433電轉(zhuǎn)化效率的比較254小結(jié)27第三章TEV蛋白酶細胞內(nèi)剪切融合蛋白體系的構(gòu)建28第一節(jié)TEV蛋白酶細胞內(nèi)剪切融合蛋白體系的碳素281|實驗材料2811菌

4、種和質(zhì)粒2812培養(yǎng)基的配置2913主要工具酶及化學(xué)試劑。2914主要儀器設(shè)備及來源2915引物合成與測序292實驗方法，3121常規(guī)分子生物學(xué)操作方法3122重組酶表達質(zhì)粒3123同源重組介導(dǎo)將HA—mTEV—bla—HA融合到BL21(DE3)基因組中313實驗結(jié)果3231質(zhì)粒的構(gòu)建3232重組片段的擴增3233重組工程介導(dǎo)重組片段整合到BL21(DE3)基因組中基因型的驗證3334TEV蛋白酶的表達3335TEV蛋白酶和融合蛋白的