15856.疣孢漆斑菌gh01的產(chǎn)漆酶優(yōu)化、培養(yǎng)及染料脫色的研究

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S13134學(xué)位論文疣孢漆斑菌GHO1的產(chǎn)漆酶優(yōu)化、培養(yǎng)及染料脫色的研究指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：趙敏教授碩士郭凱玲東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：論文答辯日期：授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾方厶g4ttq微生物2013年6月18日摘要本文研究了搖瓶培養(yǎng)條件下疣孢漆斑菌GH01產(chǎn)漆酶的最佳培養(yǎng)條件，在此基礎(chǔ)上研究了發(fā)酵罐發(fā)酵GH01的產(chǎn)酶歷程；還對(duì)GH01對(duì)4大類染料的代表性種

2、類(蒽醌類染料：茜素紅，芳甲烷類染料：堿性品紅，偶氮類染料：剛果紅，其他類型染料：亞甲基藍(lán))的脫色能力進(jìn)行了研究。獲得了如下結(jié)果：(1)搖瓶培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)基：馬鈴薯2009，1L煮沸水，葡萄糖249，蛋白胨489，磷酸二氫鉀0369，硫酸鎂0189；接種9個(gè)固體菌餅；發(fā)酵溫度為28℃；Cu2終濃度為2mM。在此發(fā)酵條件下，搖瓶培養(yǎng)GH01酶活峰值為10d左右可達(dá)到10萬(wàn)U／L以上，且結(jié)果可多次重復(fù)。使用15L發(fā)酵罐發(fā)酵GH一01，發(fā)酵

3、容量為12L，發(fā)現(xiàn)所產(chǎn)的漆酶有2次酶活高峰，且第二次峰值高于第一次峰值，二次高峰一般在13—15d左右到來(lái)。發(fā)酵罐培養(yǎng)GH01，二次峰值酶活最高為59323U／L，3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)均未能達(dá)到搖瓶酶活的峰值。(2)采用硫酸銨鹽析、透析、蛋白純化緩沖體系的確定、DEAESepharoseFastFlow陰離子交換層析、SephadexG75凝膠柱過(guò)濾層析、活性聚丙烯酰胺凝膠電泳(NativePAGE)、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)獲

4、得了GH一01純漆酶，純酶活性為16萬(wàn)U／L。在此基礎(chǔ)上，研究了GH一01純漆酶在不同介體介導(dǎo)下對(duì)上述4大類染料的脫色能力。結(jié)果表明，加入ACE和VA體系對(duì)剛果紅的脫色率有較為明顯的促進(jìn)作用，脫色率提高到80％；堿性品紅和茜素紅幾乎不受介體的影響，脫色率基本保持不變；HBT對(duì)亞甲基藍(lán)的脫色效果稍有促進(jìn)作用，脫色率由最初的5467％提高到63％。(3)在共培養(yǎng)體系下利用最佳培養(yǎng)條件的GH01對(duì)不同濃度的4大類染料進(jìn)行脫色，結(jié)果表明，GH0