高產(chǎn)耐堿性漆酶菌株的獲得及印染廢水的漆酶生物脫色研究.pdf

1、漆酶(laccase)是一種含銅元素的多酚氧化酶(p-diphenoloxidase)，又稱苯二醇氧化還原酶(EC1.10.3.2)。漆酶通過與空氣中的氧氣結(jié)合作用，能夠催化包括單、雙酚及多酚類、甲氧酚類、胺基酚類、芳香胺類、抗壞血酸和芳香硫醇類等多種酚類和非酚類化合物氧化，并生成相應(yīng)的化合物與水，同時也被稱為“綠色催化劑”。除去漆酶傳統(tǒng)應(yīng)用生漆干燥成膜外，漆酶在造紙工業(yè)、環(huán)境保護、有機合成、食品工業(yè)、染料降解、生物傳感器等領(lǐng)域都有相關(guān)

2、的應(yīng)用。但是，當(dāng)漆酶被用于上述工業(yè)中時，往往需要接觸一些偏堿性的環(huán)境。而目前大多數(shù)的真菌漆酶在高pH下活力喪失嚴重，致使其應(yīng)用受到諸多限制。選育新的漆酶產(chǎn)生菌，以生產(chǎn)出在較高pH值條件下仍具有較高酶活力的漆酶一直是研究的熱點。
　　論文以前期實驗室篩選到的一株產(chǎn)耐堿性漆酶真菌叢梗孢菌M5-3為出發(fā)株，以獲得誘變高效菌株為目的，通過UV、ARTP兩種誘變方法，結(jié)合變色圈與搖瓶產(chǎn)酶發(fā)酵的篩選方法，連續(xù)反復(fù)地誘變，獲得了一株酶活相對較高

3、的等離子體誘變突變株DM5-5，連續(xù)五次傳代后酶活為3.33IU/mL。在研究叢孢梗菌原生質(zhì)體的制備與再生條件的基礎(chǔ)上，進一步對突變株DM5-5進行原生質(zhì)體的ARTP-UV復(fù)合誘變，最終得到一株遺傳性狀相對穩(wěn)定的高產(chǎn)耐堿性漆酶突變株ZMp1-17，酶活達到8.79IU/mL。另一方面，克隆得到了叢梗孢菌M5-3中的漆酶基因，成功構(gòu)建了的pA81a-i、pA81a-ii草酸青霉M12表達載體，轉(zhuǎn)化到表達宿主草酸青霉M12中。在宿主實現(xiàn)漆酶