17781.鱖和斜帶石斑魚的ifnγ基因及其剪切異構(gòu)體的免疫功能研究

1、ByHuangBeiADissertationSubmittedtoGraduateUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofScienceInstituteofHydrobiologyChineseAcademyofSciencesMay2012鱖和斜帶石斑魚的IFNT基因及其剪切異構(gòu)體的免

2、疫功能研究摘要IFN吖主要由CD4輔助T淋巴細(xì)胞，CD8細(xì)胞毒性T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生，具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用。IFNY可調(diào)節(jié)抗病毒蛋白的表達(dá)，使細(xì)胞處于抗病毒的狀態(tài)；可活化巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其呼吸爆發(fā)作用；可促進(jìn)抗原遞呈作用；可促進(jìn)Thl細(xì)胞的分化；可誘導(dǎo)B細(xì)胞發(fā)生免疫球蛋白重鏈類別轉(zhuǎn)換等。由于低等脊椎動(dòng)物IFNT與哺乳動(dòng)物IFNY相似性非常低，近年來才鑒定到硬骨魚類的IFNT。本研究克隆了鱖和斜帶石斑魚的IFNT基因，研究它們與抗體

3、產(chǎn)生水平等因子的關(guān)系，對鱖IFN吖基因不同剪切異構(gòu)體的抗病毒活性、免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了較深入研究。鱖和斜帶石斑魚IFN丫cDNA全長分別為1036bp和867bp，編碼208和200個(gè)氨基酸，其基因組全長分別為6014和5104bp，其基因結(jié)構(gòu)與其他脊椎動(dòng)物IFN吖的結(jié)構(gòu)一致，由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成。鱖IFN吖的第3個(gè)內(nèi)含子中包含一段長度為50bp的GA重復(fù)的微衛(wèi)星序列。鱖和斜帶石斑魚的IFN吖與高等脊椎動(dòng)物的序列相似性較低，僅為3

4、25／曠39％，與其他硬骨魚類的IFN吖相似性為3800／曠779％。PolyI：C能顯著誘導(dǎo)斜帶石斑魚IFNT的表達(dá)，在胸腺中上調(diào)倍數(shù)最高，其次為頭腎、脾臟、腎臟、皮膚和鰓。PolyI：C和LPS能顯著誘導(dǎo)鱖IFN吖的表達(dá)，在頭腎和脾臟中上調(diào)倍數(shù)最高。此外，還獲得了5種鱖IFN吖剪切異構(gòu)體，并通過原核表達(dá)獲得融合蛋白。這些剪切異構(gòu)體都具有抗病毒活性，并能調(diào)節(jié)IFN吖所誘導(dǎo)的下游基因的表達(dá)。IFN吖剪切異構(gòu)體的重組蛋白刺激鱖頭腎原代細(xì)胞

5、12小時(shí)后，Mx、STATl、IRFI的表達(dá)水平顯著升高，為對照組的566倍，PKR、IRF2a、IRF2b、II心7、STAT3、Igs和MHCbeta基因也上調(diào)表達(dá)，但上調(diào)倍數(shù)較低。在鱖免疫球蛋白重鏈基因已經(jīng)報(bào)道的基礎(chǔ)上’，對鱖IFN吖基因的多態(tài)性與免疫球蛋白基因的表達(dá)和白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性的相關(guān)性進(jìn)行了研究。在柱狀黃桿菌感染后，IFNT的表達(dá)水平與白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性、IgM、lgD和IgZ的表達(dá)水平呈顯著的正相關(guān)。此外，本研究還克隆