豬圓環(huán)病毒2型抗體間接ELISA檢測試劑盒的研制和應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、利用已構(gòu)建的基因工程重組菌BL21(DE3)表達豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)ORF2編碼的結(jié)構(gòu)蛋白,并成功摸索出一種快速純化該蛋白的方法.用純化的蛋白作為包被抗原,建立了檢測豬血清中PCV2抗體的間接ELISA方法;以該方法為基礎初步組裝出試劑盒,并進行了初步應用.對ELISA的反應條件進行了探索,確定了最適工作條件.結(jié)果表明,重組蛋白抗原的最適包被濃度為0.1μg/mL,最適包被條件為37℃2h加4℃過夜;待檢血清的稀釋度為1:40;H

2、RP-兔抗豬IgG的工作濃度為1:800;待檢血清和酶標二抗的反應條件和反應時間均為37℃30min;底物室溫顯色10~15min;陰陽性臨界值為0.4.經(jīng)阻斷試驗、交叉反應試驗和重復性試驗,表明建立的間接ELISA方法是特異的,且重復性很好;與間接免疫熒光試驗(IFA)進行比較,其敏感性和特異性分別是94.3﹪和90﹪,說明兩種檢測方法間無顯著性差異;進行了試劑盒的組裝及其保存期試驗,結(jié)果表明試劑盒在4℃下至少可保存三個月.用試劑盒檢

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