雞傳染性法氏囊病間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究.pdf

1、該研究將IBDV(CJ801)囊毒在雞胚上盲傳4代而后在雞胚成纖維細(xì)胞上連傳7代得到了CEF適應(yīng)毒,大量繁殖細(xì)胞毒,經(jīng)0.1﹪甲醛滅活,經(jīng)蔗糖梯度密度離心法將其純化.用純化的IBDV作為包被抗原,建立了一種檢測血清中IBDV抗體的間接ELISA方法.通過對ELISA反應(yīng)條件的系列摸索,確定了各組分的最適工作條件,并初步組裝成試劑盒.試驗(yàn)結(jié)果表明,Costar公司生產(chǎn)的酶標(biāo)板的變異系數(shù)為3.7﹪,達(dá)到ELISA的要求;IBD抗原最適包被濃

2、度為0.0128微克/微升,最適包被條件為4℃過夜,血清稀釋度為1:200,HRP-兔抗雞IgG的最適工作濃度為1:800,待檢血清和酶標(biāo)二抗的反應(yīng)時(shí)間均為37℃1小時(shí),底物在室溫顯色20分鐘.根據(jù)已經(jīng)建立的ELISA方法及反應(yīng)條件,確定陰陽性臨界值為0.17.用該試劑盒檢測已知的IBDV的BJ836、CJ801、2512、Cu和Harbin株單因子血清呈陽性反應(yīng).而與已知的SPF雞血清呈陰性反應(yīng).用該試劑盒檢測IBV,EDS'76,N

3、D lasota,H9亞型AIV等單因子血清無交叉反應(yīng),說明建立的ELISA具有很好的特異性.該試劑盒與西班牙HIPRA公司IBDV抗體檢測試劑盒的比較結(jié)果表明:兩者共同檢測60份血清,陰陽符合率達(dá)到96﹪;平行檢測44份血清樣品,兩者檢測結(jié)果呈線性關(guān)系,且相關(guān)系數(shù)為0.900.對包被好的反應(yīng)板、酶標(biāo)二抗、陰陽性血清和試劑盒的保存條件進(jìn)行摸索,由于時(shí)間關(guān)系,只做到3個月.通過引入質(zhì)控血清進(jìn)行試劑盒的批內(nèi)、批間重復(fù)性測試的方法,達(dá)到了試劑