轉(zhuǎn)JERFs基因提高辣椒抗病性的研究.pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文轉(zhuǎn)JERFs基因提高辣椒抗病性的研究姓名：楊國(guó)順申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：盧向陽謝丙炎20031101著提高不定芽的伸長(zhǎng)率。建立了辣椒子葉高效離體再生體系，子葉不定芽高效分化培養(yǎng)基：MB6一BA35～5Omg／LIAA05～1Omg／LPA(spd，spm)75～lOO|Imol／LABAO。3mg幾A酬晚5ODlg幾十蔗糖3％瓊脂O7％；不定芽高效伸長(zhǎng)培養(yǎng)基：MB6一BAO9mg／LIAAO3mg

2、／LGA310mg／LPAl00“m01／L蔗糖3％瓊脂07％。2當(dāng)工程菌液的pH值為52時(shí)，共培養(yǎng)基中添加200“MAS，在23℃的黑暗條件下共培5d，能較明顯地提高辣椒的轉(zhuǎn)化效率。3應(yīng)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將腓基因?qū)肜苯分校瑢?duì)經(jīng)Km篩選的植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，其陽性率為81％～107％；對(duì)經(jīng)PcR檢測(cè)的陽性植株，進(jìn)行PcR—southern雜交檢測(cè)，所檢測(cè)樣品的陽性率為100％：進(jìn)～步進(jìn)行基因組DNA點(diǎn)雜交，陽性率為722％～778％；對(duì)經(jīng)

3、基因組DNA點(diǎn)雜交檢測(cè)的陽性植株，隨機(jī)抽取轉(zhuǎn)p肋船I膳宵F，口與p凇隅踞粥基因的各8株植株進(jìn)行Northern雜交檢測(cè)，肛翮口、劂基因的表達(dá)率分別為75％、875％。4獲得了對(duì)黃瓜花葉病毒、辣椒疫病與辣椒瘡痂病抗性明顯增強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因辣椒新種質(zhì)，并進(jìn)一步證實(shí)在轉(zhuǎn)基因辣椒中，未經(jīng)任何脅迫的條件下，pROK2一刪，基因的超表達(dá)能誘導(dǎo)堿性一B一葡聚糖苷酶、堿性幾丁質(zhì)酶、滲調(diào)蛋白、蛋白酶抑制劑、具RNA酶活性的蛋白與防御素等PR蛋白基因的組成型表達(dá)