番茄中一個抗病基因的遺傳轉化及抗病性的初步研究.pdf

1、番茄抗病基因中含有卷曲螺旋結構(coiled-coil，CC)、核苷酸結合位點(Nucleotide binding site，NBS)和富含亮氨酸的重復序列(Leucine-rich repeat，LRR)結構域是植物中最大類抗病家族之一，其中多數的R基因都具有核苷酸結合位點(NBS)和富含亮氨酸的重復序列(LRR)結構域。CC-NBS-LRR結構是R基因重要的結構，對植物的抗病起到很重要的作用。青枯病、早疫病、晚疫病、枯萎病、葉霉病

2、等病害為番茄生產帶來了毀滅性的的影響，同時外界不良的環(huán)境以及各種病原菌通常會給植物生長發(fā)育造成一定侵害，植物在長期的進化過程中已經形成了完善的自我保護機制以抵御病原菌入侵以及外界不良環(huán)境的傷害。研究表明植物抗病R基因能夠識別病原體引發(fā)過敏性反應(Hypersensitive response，HR)，從而提高植物病害的防御能力。
　　本研究中通過酵母雙雜篩選獲得了DDB1 IP9基因，與番茄中重要DDB1基因蛋白具有相互作用，并通

3、過Sol Genomics Network和NCBI(National Center forBiotechnology Information Search database)進行信息比對，含有CC-NBS-LRR結構，預測具有R基因抗病性，從而用番茄中過表達轉基因方式進一步探究。分子克隆中通過強啟動子CaMV35S具有很好的表達效果，將DDB1IP9構建到pBI121∷35S載體上，獲得pBI121∷DDB1IP9重組載體，構建了DD

4、B1IP9過表達載體并通過根瘤農桿菌介導轉化到野生型番茄中，進行篩選獲得DDB1IP9高表達的陽性過表達番茄株系。并通過構建煙草過表達載體PBTEX∷DDB1IP9-Flag，進行瞬時表達。進行抗病實驗實驗中，對轉基因T1代陽性DDB1IP9轉基因番茄幼苗和野生型番茄AC接種丁香假單胞菌番茄致病變種(Pst.DC3000)，進行表觀觀察比較番茄植株病發(fā)情況和平板劃線計算比較1cm2同位置葉片的菌落數差異，通過病菌接種實驗比較，初步分析可

5、以發(fā)現番茄DDB1IP9的抗病功能。
　　本研究結果表明，DDB1IP9轉基因植株的發(fā)病情況明顯少于野生型AC，野生型植株的發(fā)病情況比較嚴重;打孔取樣1cm2菌落數發(fā)現野生型AC的菌落數是DDB1IP9轉基因的2-4倍，說明DDB1IP9轉基因對Pst.DC3000具有明顯高于野生型番茄抵抗作用，具有比較明顯的抗病性。過表達DDB1IP9基因能夠提高番茄對Pst.DC3000的抵抗性，提高番茄抗病性，對番茄的種植帶了很好經濟價值。