馬鈴薯Y病毒NIa蛋白酶基因介導(dǎo)的抗病性研究.pdf_第1頁
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1、為了制備PVY-C NIa的抗血清,首先構(gòu)建了6kD-NIa和VPg基因片段的原核表達(dá)載體.酶切和PCR 擴(kuò)增得到PVY-C 6kD-NIa和VPg基因片段,分別克隆到表達(dá)載體pET-28a中,酶切鑒定、PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定結(jié)果證明目的基因正確插入到了載體pET-28a中,而且含有正確的閱讀框架.經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,分別表達(dá)了分子量約為27kDa和25kDa的蛋白.純化了VPg蛋白免疫兔子后,得到效價(jià)為1:3000的抗血清.Western

2、 blot分析表明VPg抗血清能夠與感染PVY-C植物中的NIa蛋白發(fā)生特異免疫反應(yīng),成功地獲得了特異性VPg多克隆抗體.對(duì)轉(zhuǎn)PVY-C 6kD-NIa基因煙草T<,2>和T<,3>代進(jìn)行抗病性試驗(yàn),攻毒結(jié)果分三種類型:全部表現(xiàn)為抗病和恢復(fù);抗性喪失,全部表現(xiàn)為感病;抗病、恢復(fù)和感病三種表現(xiàn)型,發(fā)生了性狀分離.對(duì)T<,2>代和T<,3>代轉(zhuǎn)基因煙草PCR檢測(cè)和Southern blot結(jié)果表明PVY-C 6kD-NIa基因不僅整合到煙草

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