RNA干涉轉(zhuǎn)基因馬鈴薯抗卷葉病毒(PLRV)抗病性研究.pdf

1、馬鈴薯卷葉病毒屬黃化病毒組,由蚜蟲以持久方式傳播,是馬鈴薯上最重要的病毒病害之一。馬鈴薯卷葉病毒可侵染馬鈴薯引起卷葉、黃化、矮縮、僵化及塊莖網(wǎng)狀壞死等癥狀,嚴(yán)重影響馬鈴薯的產(chǎn)量和品質(zhì),是一種世界范圍的馬鈴薯的重要病害。
　　RNAi是由dsRNA介導(dǎo)的基因沉默現(xiàn)象,是細(xì)胞內(nèi)的一種防御機(jī)制,可特異地降解細(xì)胞內(nèi)與之具有同源性的核酸,達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)編碼基因的表達(dá)的作用。由于RNAi具有抗病毒表現(xiàn)型為高抗或近似于免疫,抗病性更持久,生物安

2、全性高等優(yōu)點(diǎn),具有更加廣闊的應(yīng)用前景。因此,探討利用RNA介導(dǎo)抗性來(lái)培育抗病毒轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的這一新策略的可行性和應(yīng)用價(jià)值具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　本研究利用大田統(tǒng)計(jì)方法結(jié)合分子生物學(xué)手段和生物信息學(xué)手段對(duì)本室轉(zhuǎn)化的23個(gè)轉(zhuǎn)RNA干涉載體馬鈴薯突變株進(jìn)行抗病性鑒定。具體研究成果如下:
　　1.通過(guò)大田試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了一些具有明顯特征突變的轉(zhuǎn)化體,如株高、葉片形態(tài)、產(chǎn)量等方面,說(shuō)明轉(zhuǎn)入的外源載體引起了原來(lái)馬鈴薯基因組的改變。
　

3、　2.利用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)技術(shù)研究受侵染后馬鈴薯卷葉病毒基因在這些轉(zhuǎn)化體中的表達(dá)情況,其中4p1-3、4p2-3、4p2-7、4號(hào)、5p1-6、5p2-6、5號(hào)為陽(yáng)性,初步說(shuō)明除這幾個(gè)株系以外的株系均有一定的馬鈴薯卷葉病毒抗性,所轉(zhuǎn)入的RNA干涉載體起到了一定的干涉PLRV作用。
　　3.通過(guò)熒光定量PCR分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究,可以發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)RNA干涉載體均有不同水平的馬鈴薯卷葉病抗性,但是抗性水平差異很大。其中4P1-3、4P2-3、4