19515.不同來(lái)源的β葡萄糖苷酶的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)分析

1、分類(lèi)號(hào)：Q782密級(jí)：(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：09841010不同來(lái)源的13葡萄糖苷酶的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)分析Cloning，Expression，CharacterizationofBetaglucosidasesfromDifferentThermophilicMicroorganisms專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：生物化學(xué)與分f生物學(xué)指導(dǎo)教師姓名：千艷萍教授研究生姓名：胡丌蕾申清學(xué)位級(jí)別：理學(xué)碩上論文提交R期：20t2

2、年1月論文諜題來(lái)源：巾科院微生物所蚓家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，1：放性課題學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要B葡萄糖苷酶，又稱(chēng)DD葡萄糖苷水解酶(EC32121)，能特異性地催化低聚糖(通常26個(gè)單糖殘基)、烷基和芳香族烴基末端非還原性的BD一葡萄糖苷鍵的水解。6一葡萄糖苷酶是纖維素酶系中的關(guān)鍵限速酶。獲得比活高，產(chǎn)量大，熱穩(wěn)定性好的8一葡萄糖苷酶，一直是研究纖維素酶水解纖維素的熱點(diǎn)問(wèn)題。本研究從耐熱子囊菌和嗜熱脫氮地芽孢桿菌中克隆到四種p。葡萄糖苷酶

3、基因覷匆∥、gebgll、gebgl2和gebgl3，并將它們構(gòu)建到不同的表達(dá)載體pRXz和pGEX2LT上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，構(gòu)建出七種B葡萄糖苷酶工程菌，且均實(shí)現(xiàn)了它們?cè)诖竽c桿菌中的表達(dá)。通過(guò)對(duì)工程菌BL21(pGEXgebgll)表達(dá)純化出的B葡萄糖苷酶酶學(xué)性質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)，該重組酶的最適溫為60℃一70℃，最適pH值為70。該酶在60。C下至少能穩(wěn)定存在4h，在pH5—10的緩沖液中孵育4小時(shí)，酶活力仍能維持在90％