茶葉中β-葡萄糖苷酶基因cDNA克隆與序列分析.pdf

1、該論文首次從茶葉中克隆出β-葡萄糖苷酶基因cDNA序列,結果如下:依據(jù)茶樹葉片生化特點,應用Chomcznski一步法,并作了部分修改,從鮮葉中分離、提取總RNA.利用GenBank中已經(jīng)登錄的其它植物中該酶基因的保守序列,設計一對簡并引物,采用RT-PCR技術,從茶樹擴增出208bp的cDNA片段.將擴增片段克隆到PMD18-T上進行序列測定和分析,結果表明,此片段核苷酸序列與其他植物β-葡萄糖苷酶基因cDNA相應序列有很好的同源性,

2、推斷該PCR特異產(chǎn)物為茶樹β-葡萄糖苷酶基因cDNA片段.以此特異片段設計特異引物,采用RACE技術分別獲得β-葡萄糖苷酶cDNA3'端581bp和5'端895bp片段,后再依據(jù)上述兩段序列設計一對引物,擴增出酶的全長序列1475bp.經(jīng)Blast搜索表明:克隆所得堿基序列和推導的氨基酸序列與已克隆出的小松樹、西葫蘆擬南芥等植物體內(nèi)β-葡萄糖苷酶基因的cDNA相應序列有40﹪—60﹪的同源性,因此我們推斷擴增所得到的序列為茶樹中β-葡萄

3、糖苷酶基因的cDNA.利用分子生物學軟件對氨基酸序列和二級結構進行分析和比較.結果表明,該序列的3'-端和5'端的非編碼序列長度分別為189bp和233bp,開放閱讀框為1050bp,編碼350氨基酸,其轉運肽長度為82個氨基酸,成熟蛋白由257個氨基酸組成.經(jīng)Garnier法預測,茶樹β-葡萄糖苷酶蛋白二級結構與其他植物相似,螺旋構象14.33﹪、伸展構象33.81﹪、折疊構象25.43﹪.前體蛋白的分子量為40kDa,等電點(PI)