BYDV-GPV與GAV混合侵染蚜傳專化性研究.pdf

1、小麥黃矮病是麥類作物的重要病害之一.普通小麥種質(zhì)資源中未篩選到抗性材料,基因工程育種是培育抗病品種的手段之一.病毒的外殼蛋白(CP)基因介導(dǎo)的抗病性在抗病毒基因工程育種中研究最早、應(yīng)用最廣泛的.中國也已獲得抗BYDV-GPV的小麥轉(zhuǎn)CP基因的材料,但抗病毒轉(zhuǎn)CP基因植物帶來的病毒外殼蛋白的異源裝配及RNA重組等生態(tài)安全性問題也越來越受到關(guān)注.該研究對(duì)大麥黃矮病毒(Barly Yellow Dwarf Virus,BYDV)GAV與GPV

2、之間混合侵染的蚜傳特異性與分子變異進(jìn)行探索,旨在為小麥抗病毒基因工程的生態(tài)安全性評(píng)價(jià)體系建立一種可能的模式.以中國麥區(qū)的大麥黃矮病毒流行株系GAV、GPV為材料,利用它們的蚜傳特異性,將由禾谷縊管蚜(Rhopalosiphum padi L.,Rp)傳播、麥長管蚜(Sitobion avenae F.,Ma)不能傳播的GPV和由麥長管蚜傳播、禾谷縊管蚜不能傳播的GAV混合侵染到岸黑燕麥上,觀察發(fā)病情況.對(duì)混合侵染的病株再用禾谷縊管蚜和麥

3、長管蚜繼代傳毒,系統(tǒng)觀察介體?；缘淖儺?蚜傳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在獲得的93株獨(dú)立的混合侵染蚜傳體系中,有16株在繼代傳毒中發(fā)生了蚜傳?；缘母淖?占總數(shù)的17.2﹪.蚜傳表現(xiàn)型的變化說明可能存在異源包裝現(xiàn)象.采用DAS-ELISA法對(duì)混合侵染后代進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果表明:69個(gè)混合侵染后代樣品均與美國的MAV抗血清有強(qiáng)烈的特異性反應(yīng),無論麥長管蚜傳毒株還是禾谷縊管蚜傳毒株,均傳播的是GAV.進(jìn)一步證明了存在異源包裝現(xiàn)象.根據(jù)已報(bào)道的大麥黃矮病

4、毒GAV、GPV和PAV的外殼蛋白基因序列、通讀蛋白(RTP)基因序列設(shè)計(jì)了六對(duì)特異性引物,用RT-PCR技術(shù)對(duì)12個(gè)混合侵染后代的檢測(cè)結(jié)果表明:用GAV的CP基因引物擴(kuò)增均獲得了目的基因;用GAV的RTP基因引物從其中6株中擴(kuò)增出了目的基因片段;而用GPV的CP與RTP基因的引物均未能擴(kuò)增出目的片段.Rp傳毒株可擴(kuò)增出GAV的目的基因,而檢測(cè)不到GPV,說明在所測(cè)定的混合侵染后代中存在異源包裝.部分侵染后代的CP和RTP核苷酸序列比較