自玉米F-,1-種子獲得父本、母本全套DNA指紋圖譜的研究.pdf

1、玉米種子真?zhèn)魏图兌葯z驗(yàn)對玉米生產(chǎn)具有重要意義.基于玉米品種純度及其真?zhèn)舞b定實(shí)踐中送檢方在提供雜交種子的同時均需提供父母本,以作為模板對照鑒別雜交種.但處于品種保護(hù)及商業(yè)秘密,送檢方不愿或無法提供親本種子,給檢測工作帶來很大的難度.同時在玉米雜交種選育及生產(chǎn)中,存在使用他人培育或擁有的自交系而卻逃避使用義務(wù),使培育者和產(chǎn)權(quán)擁有者難以維權(quán)保護(hù).而玉米F<,1>代種子的種皮組織基因組和母本自交系基因組完全相同,該研究就借助這一特點(diǎn)同時使用SS

2、R標(biāo)記技術(shù),分離F<,1>種子種皮之后,初步建立一套以F<,1>代種子為實(shí)驗(yàn)材料經(jīng)SSR引物擴(kuò)增,獲得父本、母本全套DNA指紋圖譜的技術(shù)體系.內(nèi)容包括:1、通過分析比較,確定快速、干凈分離的堿溶法作為種皮分離方法.同時對種皮組織和種子胚DNA提取方法及PCR,進(jìn)行優(yōu)化及確定最佳反應(yīng)體系篩選.2、從162對SSR引物中篩選出30對主帶清晰帶型穩(wěn)定,重復(fù)性好的引物.30對引物在60個親本自交系中共檢測出119個等位基因,平均3.9個,每對引

3、物可以檢測到2-7個數(shù)目不等的等位基因;片段大小介于73bp-527bp之間;多態(tài)性信息量為0.24-0.82,平均為0.56.30對SSR引物PCR擴(kuò)增玉米單交種京科9、京科2、農(nóng)大108、京早13和唐抗5.得到每個單交種的多份雙親互補(bǔ)DNA指紋圖譜及多個雙親互補(bǔ)型引物.3、借助雙親互補(bǔ)型引物,將雜交種及雙親和雜種種皮共擴(kuò)增,獲得種皮DNA指紋圖譜.經(jīng)Jaccard公式計算得出:種皮SSR-DNA指紋與母本SSR-DNA指紋相似系數(shù)為

4、1,驗(yàn)證了兩者基因組成相同.以種皮SSR-DNA指紋對人工摻雜親本籽粒的SC704雜交種種子進(jìn)行純度準(zhǔn)確驗(yàn)證,從94?；旌嫌衩鬃蚜Ｖ?準(zhǔn)確檢測出混入的5粒父本和4粒母本;以種皮SSR-DNA指紋為標(biāo)準(zhǔn),在實(shí)踐檢驗(yàn)中以10份農(nóng)大108大田種子進(jìn)行純度檢測,檢測純度平均92％和田間種植鑒定純度92.5％相近;認(rèn)為以種皮DNA指紋為參照進(jìn)行品種的純度檢測是準(zhǔn)確可靠的.4、確定了以F<,1>種子種皮指紋圖譜為參照標(biāo)準(zhǔn)對照,實(shí)施玉米種子純度檢測及