淋巴囊腫病毒的檢測及其對牙鲆鰓細胞系的感染研究.pdf

1、淋巴囊腫病是一種發(fā)生在全世界范圍的常見的魚類皮膚病,由淋巴囊腫病毒引起.患病魚體表長滿皮膚瘤狀和菜花狀的贅生物,面目可憎,喪失市場價值,造成極大的經濟損失.分離培養(yǎng)淋巴囊腫病毒,篩選中和抗體,對研制淋巴囊腫病疫苗,預防該病的發(fā)生極為重要.由于淋巴囊腫病為慢性病,活體攻毒實驗耗時長且不易成功,因此,病毒在細胞中的培養(yǎng)是該項研究的基礎和關鍵所在.該文運用多種方法,證實牙鲆鰓細胞系為淋巴囊腫病毒的敏感細胞系,并對淋巴囊腫病毒感染鰓細胞的最適條

2、件和時間動力學等因素作了較為系統(tǒng)的觀察.該文通過改變培養(yǎng)牙鲆鰓細胞的氣體、血清濃度、接種密度等條件,系統(tǒng)研究了鰓細胞在20℃(淋巴囊腫病發(fā)病溫度)的最適生長條件.實驗結果表明,牙鲆鰓細胞的最適接種密度為3-4×10<'5>cells/ml,開放式培養(yǎng)時最適CO<,2>濃度為2﹪,含2﹪血清的培養(yǎng)液能較好的維持細胞生存而不大量增殖,含10﹪血清的培養(yǎng)液能使細胞正常生長增殖,含20﹪血清的培養(yǎng)液能使細胞迅速增多,并能使細胞密度維持很高的水平

3、.該文采用不連續(xù)密度梯度離心的方法分離提純淋巴囊腫病毒作為抗原,運用單克隆抗體技術,重申選、克隆出2株產生抗牙鲆淋巴囊腫病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞(1A6、1H9).經免疫熒光抗體法檢測,2株單抗與淋巴囊腫細胞包涵體呈陽性反應,可作為檢測病毒的有利工具.以病毒粗提液感染鰓細胞,1-2天出現(xiàn)明顯細胞病變,TCID<,50>為40μl 2<'2.57>稀釋的病毒液.以出現(xiàn)細胞病變培養(yǎng)孔的上清液接種正常鰓細胞,細胞不出現(xiàn)病變;以出現(xiàn)細胞病變培