細(xì)小病毒H-1感染對人肝癌細(xì)胞系QGY-7703基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、細(xì)小病毒是一組無囊膜，線狀，裂解性的DNA病毒，它們對轉(zhuǎn)化細(xì)胞具有殺傷效應(yīng)而對相應(yīng)的非轉(zhuǎn)化細(xì)胞則無害，是基因治療的候選載體。肝癌是中國和南亞地區(qū)最常見的疾病之一。幾株肝癌細(xì)胞系和細(xì)小病毒H-1的相互關(guān)系已在以往的工作中進(jìn)行過研究，其中肝癌細(xì)胞系QGY-7703是研究最為深入的一個。為了了解細(xì)小病毒感染后細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄水平上的全面反應(yīng)以及病毒可能的細(xì)胞靶因子，本文以QGY-7703-H-1作為一個模型系統(tǒng)，采用了能同時監(jiān)測上千基因表達(dá)變化的基

2、因芯片技術(shù)，以期識別和細(xì)小病毒-宿主相互作用機(jī)制有關(guān)的細(xì)胞靶因子基因及其可能參與的途徑。細(xì)小病毒的復(fù)制緊緊依賴于和增殖及分化有關(guān)的細(xì)胞因子，尤其是和細(xì)胞周期S-期有關(guān)的因子。反過來，病毒的增殖又使細(xì)胞周期停滯在S/G2期。于是，考慮到病毒復(fù)制對細(xì)胞周期S一期的依賴及其反過來對周期的于擾，本文采用了同步化的細(xì)胞并選擇較早的時間點對H—1感染細(xì)胞和對照細(xì)胞的基因表達(dá)譜進(jìn)行比較，以此減少細(xì)胞狀態(tài)不同造成的樣品差異，提高相比較樣品的可比性。由于

3、目前還沒有關(guān)于 QGY—7703細(xì)胞同步化方法的文獻(xiàn)報導(dǎo)，因此，本工作的第一部分主要是尋找使該細(xì)胞同步化的合適方法和最佳條件，并監(jiān)測H—l感染同步化的細(xì)胞后病毒復(fù)制及 NSI蛋白表達(dá)的情況，為后面的實驗確定合理的時間點和分析背景、我們選擇了兩個時間點。第二部分則對感染組和對照組細(xì)胞在所選時間點的基因表達(dá)譜進(jìn)行比較，以識別表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平上發(fā)生改變的基因。通過數(shù)據(jù)分析和文獻(xiàn)研究，以期發(fā)現(xiàn)病毒感染對細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平影響的特點以及和以往研究結(jié)果的