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文檔簡介
1、苜蓿中華根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM分離自新疆的和田苜蓿,能夠在含0.6mol/LNaCl的FY基本培養(yǎng)基中生長.通過Tn5-1063a突變得到042BM的轉(zhuǎn)座子插入突變株,從3000多個突變株中篩選到鹽敏感突變株042BM-X1和042BM-X2.耐鹽性實驗表明,它們都不能在含0.4mol/L NaCl的固體FY培養(yǎng)基和0.5mol/L NaCl的液體FY培養(yǎng)基上生長.Southern雜交結(jié)果顯示,
2、Tn5在突變株基因組中以單拷貝形式插入,表明突變株的耐鹽性下降與Tn5插入突變有關(guān).使用質(zhì)粒自連法克隆了042BM-X1和042BM-X2中Tn5插入位點的側(cè)翼序列.通過EcoRI酶切突變株基因組,得到完整的Tn5(含有在大腸桿菌中起始復(fù)制的oriV)及其側(cè)翼的序列片段,該片段自連后轉(zhuǎn)化大腸桿菌,以Tn5兩端已知的序列設(shè)計引物進行測序.BLAST的分析測序結(jié)果表明,042BM-X1和042BM-X2中Tn5分別定位在苜蓿中華根瘤菌102
3、1染色體上SMc02682和SMc00419基因內(nèi)部,該實驗證明它們和042BM耐鹽相關(guān),命名為rst-Ox1和rst-Ox2基因.rst-Ox1基因的功能未知,而rst-Ox2基因和熱帶根瘤菌谷胱甘肽合成酶基因gshB有很高的同源性.PCR擴增得到包含啟動子的042BM rst-Ox1和rst-Ox2基因的全長.序列測定和BLAST分析表明,它們和苜蓿中華根瘤菌1021的相應(yīng)基因有99﹪同源性,042BM的rst-Ox1基因功能未知,
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