豬大腸桿菌亞單位疫苗的研究.pdf

1、該論文著重研究了北京地區(qū)豬致病性大腸桿菌菌毛及熱敏感腸毒素的提取和純化,并在此基礎(chǔ)上研制出了大腸桿菌的菌毛、腸毒素亞單位疫苗,分別在實(shí)驗(yàn)室和臨床上進(jìn)行了免疫保護(hù)試驗(yàn),主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:大腸桿菌菌毛的提取和純化,將大腸桿菌K<,99>菌株在改良明卡培養(yǎng)基上培養(yǎng)、收獲,采用60℃水浴法提取菌毛,經(jīng)硫酸胺沉淀和Sephadex G-100凝膠層析后,采用甘露糖抵抗血凝反應(yīng)(MRHA)檢測(cè),獲得純化的菌毛蛋白.取純化菌毛抗原與弗氏完全佐劑

2、和礦物油佐劑,分別制成首免及加強(qiáng)免疫用疫苗,經(jīng)3次免疫家兔后,血清抗體瓊擴(kuò)效價(jià)達(dá)1:16,表明提取的菌毛蛋白純度高、免疫原性好.兔回腸結(jié)扎試驗(yàn)(ligation of rabbit ileum,LRI)、兔皮膚蘭斑試驗(yàn)(blue spot inrabbit skin,BSRS)和平板免疫溶血試驗(yàn)(plate immune hemolysi s assay,PIHA)測(cè)定大腸桿菌熱敏感腸毒素的比較,結(jié)果表明PIHA與LRI的LT檢出率比B

3、SRS明顯提高,而且PIHA能同時(shí)測(cè)定十幾個(gè)樣品,大大提高了檢測(cè)速度和效率.產(chǎn)生熱敏感腸毒素的菌株經(jīng)培養(yǎng),收獲、離心,硫酸胺沉淀、Sephadex-G100凝膠層析和平板免疫溶血試驗(yàn)檢驗(yàn),獲得純化的腸毒素蛋白,SDS-PAGE電泳表明,LT由2個(gè)分子量分別為12.5KD和略大于25KD的蛋白組成.取提純的大腸桿菌K<,99>菌毛和熱敏感腸毒素用甲醛滅活,制成大腸桿菌亞單位油乳劑滅活苗,經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn),小鼠的免疫保護(hù)試驗(yàn)和疫苗保存期

4、試驗(yàn),表明疫苗的免疫性和安全性良好,在4℃條件下至少可以保存一年以上.選取北京地區(qū)2個(gè)種豬場(chǎng)進(jìn)行疫苗的免疫試驗(yàn),試驗(yàn)分為3組,試驗(yàn)Ⅰ組,母豬產(chǎn)前5周和2周,分別肌肉注射大腸桿菌亞單位疫苗2ml.試驗(yàn)Ⅱ組,母豬產(chǎn)前2周,仔豬出生10日齡分別肌肉注射大腸桿菌亞單位疫苗2ml.對(duì)照組,母豬、仔豬均不接種疫苗.采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法判定疫苗免疫效果,結(jié)果表明,疫苗安全性良好,仔豬的發(fā)病率、死亡率在免疫組與對(duì)照組之間差異極顯著(p<0.01),免疫組中,