防制仔豬大腸桿菌性腹瀉四價(jià)菌毛蛋白卵黃粉的研制.pdf

1、初生和斷奶仔豬大腸桿菌性腹瀉病的主要病原是產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。ETEC的致病作用與其具有黏附素性菌毛和產(chǎn)腸毒素密切相關(guān)，二者缺一不可。與仔豬腹瀉有關(guān)的黏附素抗原主要有K88、K99、987P和F41。ETEC致病過(guò)程中重要的一個(gè)環(huán)節(jié)是細(xì)菌借黏附素性菌毛黏附固定在仔豬小腸絨毛上皮細(xì)胞上，進(jìn)而增殖并產(chǎn)生大量腸毒素引起小腸吸收分泌功能失常而致腹瀉。在對(duì)該病的傳統(tǒng)防制上

2、主要采用大腸桿菌多價(jià)苗、抗菌藥物或動(dòng)物高免血清，但是每種方法各有其缺陷。目前，卵黃抗體作為一類(lèi)可替代抗生素的高效生物防治制劑在治療和預(yù)防新生和斷奶仔豬大腸桿菌性腹瀉中的作用受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。 本研究分別對(duì)28周齡的開(kāi)產(chǎn)母雞采用大腸桿菌四價(jià)(K88、K99、987P、F41)混合菌毛蛋白苗免疫和菌體免疫，比較兩種方法獲得結(jié)果的差異。結(jié)果表明，兩種方法均可以獲得卵黃抗體，但菌毛免疫獲得的效價(jià)均高于菌體免疫。其中菌毛免疫的K88

3、的效價(jià)比菌體免疫高2個(gè)滴度左右，達(dá)到2<'9>。在此基礎(chǔ)上用菌毛蛋白苗免疫開(kāi)產(chǎn)母雞，三免后卵黃抗體效價(jià)已經(jīng)達(dá)到較高水平，且高峰期可以維持三個(gè)月左右。對(duì)所獲得的高免卵黃液進(jìn)行噴霧干燥，結(jié)果表明，140℃進(jìn)氣,72℃出氣最適合高免卵黃粉的制得，且卵黃粉中IgY活性不變。 為了進(jìn)一步研究高免卵黃粉的穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)采用溫度梯度，pH梯度，蛋白酶以及保存時(shí)間長(zhǎng)短的不同等外部因素檢測(cè)試驗(yàn)制得的高免卵黃粉中IgY活性的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)制

4、得的高免卵黃粉穩(wěn)定性良好，具有耐酸、耐堿、耐蛋白酶、易于保存等特性。 通過(guò)ETEC對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞的粘附和粘附抑制試驗(yàn)，表明噴霧干燥前后的高效價(jià)卵黃抗體均能有效地阻止ETEC對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞的粘附。實(shí)驗(yàn)中，粘附組單個(gè)細(xì)胞粘附的K88<'+>菌數(shù)平均為23.79個(gè)；噴霧干燥前的卵黃抗體處理的K88粘附抑制組單個(gè)細(xì)胞粘附的K88<'+>ETEC數(shù)平均為1.98個(gè)，P<0.01；噴霧干燥后的卵黃抗體處理的K88粘附抑制組單個(gè)細(xì)胞粘