防治仔豬大腸桿菌性腹瀉復合型全蛋粉的初步研制.pdf

1、研究內(nèi)容一：兩種方法檢測卵黃抗體效價的比較 為了確定一種特異性強、敏感性高、簡便、快捷的抗體檢測方法，本研究在用F41油佐劑滅活苗免疫蛋雞獲得卵黃抗體后，分別用微量凝集法和瓊脂擴散法檢測卵黃抗體中F41抗體的效價，比較兩種方法測定結果的差異。結果表明，兩種方法均可以用于卵黃抗體效價的檢測，瓊脂擴散法測定的結果比微量凝集法測定的結果高兩個滴度。鑒于微量凝集法的快速、經(jīng)濟等優(yōu)點，該方法被確定為后期實驗中血清抗體和卵黃抗體效價的測定方

2、法。 研究內(nèi)容二: 雞抗豬大腸桿菌血清抗體和卵黃抗體動態(tài)變化規(guī)律及其相互關系的研究 用豬源大腸桿菌四價(K88、K99、987P、F41)滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，微量凝集法定期檢測蛋雞血清抗體和卵黃抗體的效價。結果表明，血清抗體比卵黃抗體出現(xiàn)早，免疫蛋雞血清中和卵黃中四種抗體的消長規(guī)律基本相似，但不同抗體水平之間存在一定的差異；整個實驗期間血清抗體水平均比卵黃抗體水平高。 研究內(nèi)容三:重組人溶菌酶在雞蛋清中的表達與卵

3、黃抗體效價相互關系的研究 本實驗按菌苗免疫組，質(zhì)粒注射組，菌苗免疫質(zhì)粒注射組，把雞只分為三組，微量凝集法測定卵黃抗體的效價，RBB-R染料法檢測人溶菌酶的表達量。結果表明菌毛免疫組卵黃抗體的效價和質(zhì)粒注射組人溶菌酶的表達量和表達時間與菌苗免疫質(zhì)粒注射組的結果相似，說明菌苗免疫同時注射質(zhì)粒對卵黃抗體效價和人溶菌酶表達幾乎沒有影響，證實了兩者結合應用的可行性，為全蛋粉的研制和人溶菌酶的生產(chǎn)奠定了基礎。 由產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(

4、ETEC)引起的仔豬腹瀉是一種常見病，該病具有發(fā)病急，傳播快，死亡率高等特點，嚴重危害養(yǎng)殖業(yè)。ETEC主要有兩類毒力因子，即腸毒素(ST和LT)和黏附素性菌毛。ETEC首先通過黏附素性菌毛與小腸黏膜上皮細胞上的特異性受體相結合而定居下來，繼而大量增殖，產(chǎn)生并積累腸毒素使腸上皮細胞分泌功能亢進而發(fā)生腹瀉。生產(chǎn)上防制該病主要是使用大腸桿菌多價苗和基因工程苗免疫母畜以保護仔畜免遭侵害，但母源抗體持續(xù)時間短，且存在個體差異，不足以保護整個仔畜生

5、長階段。治療多采用抗菌藥物或動物高免血清，但長期服用抗生素容易產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留，對人、畜的健康造成危害；用特異性抗體阻斷ETEC對小腸上皮細胞的黏附是防治本病的有效手段。仔畜口服高免疫血清雖然能夠預防腹瀉，但因其生產(chǎn)成本較高，產(chǎn)量較低而在使用中受到限制。雞卵黃抗體(IgY)作為一種免疫球蛋白，和血清抗體(IgG)的功能相似，但生產(chǎn)成本較低，易于大量生產(chǎn)，有望開發(fā)為一類可替代抗生素的高效生物防治制劑。 本研究在用大腸桿菌油佐劑

6、滅活苗免疫蛋雞獲得卵黃抗體后，分別用微量凝集法和瓊脂擴散法檢測卵黃抗體中抗體的效價，比較兩種方法測定結果的差異。實驗結果表明，兩種方法均可以用于卵黃抗體效價的檢測，瓊脂擴散法測定的結果比微量凝集法測定的結果高兩個滴度，但微量凝集法更方便、快捷。在此基礎上用微量凝集法定期檢測經(jīng)大腸桿菌四價(K88、K99、987P、F41)滅活疫苗免疫的蛋雞血清抗體和卵黃抗體的效價。結果表明，血清抗體比卵黃抗體出現(xiàn)早，免疫蛋雞血清中和卵黃中四種抗體的消長

7、規(guī)律基本相似，但不同抗體水平之間存在一定的差異。整個實驗期間血清抗體水平均比卵黃抗體水平高。 通過ETEC對仔豬小腸上皮細胞的黏附和黏附抑制試驗，表明經(jīng)多次免疫后獲得的高效價卵黃抗體能有效地阻止ETEC對仔豬小腸上皮細胞的黏附。實驗中，黏附組單個細胞黏附的K88+菌數(shù)平均為24.58個；而經(jīng)卵黃抗體(效價為24)處理過的黏附抑制組單個細胞黏附菌數(shù)平均為0.276個。充分證實了卵黃抗體對防治仔豬腹瀉的臨床應用價值。 為了進