云南撒壩豬大腸桿菌HPI主要結(jié)構(gòu)基因及其致病性研究.pdf

1、為了探討云南撒壩豬大腸桿菌HPI主要結(jié)構(gòu)基因及其致病性關(guān)系,主要通過PCR擴增實驗、菌落原位斑點雜交實驗、攝鐵實驗、動物實驗和耐藥性實驗等方法研究大腸桿菌的致病關(guān)系。首先對CVCC1565菌株進行PCR擴增檢測得到陽性對照,再以44株優(yōu)勢血清型大腸桿菌菌株為材料,以PCR擴增和菌落原位斑點雜交方法檢測高致病性毒力島(HPI) irp2、irp1、irp3、irp4和irp5基因,測序,各基因與GENBANK上的序列進行比對得出同源性均在

2、95％以上,另外根據(jù)系統(tǒng)進化樹的進化距離比較,得出實驗菌株在遺傳學上具有EIEC、UPEC、Y-pestis、EPEC的特點,蛋白預(yù)測結(jié)果表明了HPI中HMWP1蛋白條帶的差異與糖基化位點有關(guān),磷酸化位點參與細菌的能量代謝和生物氧化,使細菌能捕獲鐵離子來增強HPI的致病力;SDS-PAGE實驗(濃度為0.2mmol/L2-2’-雙吡啶)在缺鐵的情況下得出10株大腸桿菌優(yōu)勢血清型HPI菌株具有HMWPs的表達;CAS固體培養(yǎng)基中菌株能產(chǎn)生

3、橘黃色暈圈;β-內(nèi)酰胺類抗生素藥敏實驗,得出對頭孢哌酮、頭孢唑啉比較敏感;動物致病性實驗得出LD50為102.93μl,解剖病死小白鼠發(fā)現(xiàn),肝臟充血,脾臟邊緣呈暗紫色,十二指腸水腫等明顯病變。病理組織學觀察可見,肺臟毛細血管充血、出現(xiàn)肺氣腫及肺泡間隔增寬,心肌纖維斷裂、排列紊亂,肝細胞腫大、變性及肝竇出血,十二指腸上皮細胞變性壞死、腸絨毛脫落等。通過以上的這些實驗結(jié)果表明:云南撒壩豬大腸桿菌HPI主要結(jié)構(gòu)基因及其致病性關(guān)系存在著一定關(guān)系