馬鈴薯野生二倍體與雙單倍體葉肉原生質(zhì)體的培養(yǎng)及融合.pdf

1、馬鈴薯是唯一的糧菜兼用作物,其原生質(zhì)體培養(yǎng)及體細(xì)胞雜交是"分解-綜合"育種的重要環(huán)節(jié),也是將具有抗逆、抗病等優(yōu)良性狀的野生種資源引入栽培種中的重要途徑.試驗(yàn)以3個(gè)雙單倍體品系和3個(gè)野生二倍體為材料,進(jìn)行了馬鈴薯葉肉原生質(zhì)體的培養(yǎng)及融合的研究,同時(shí)也探討了一些外界條件如真空抽氣、低溫預(yù)處理、褐化抑制劑等對(duì)原生質(zhì)體培養(yǎng)的影響,獲得了如下結(jié)果:真空抽氣能夠有效地提高原生質(zhì)體的數(shù)量,降低原生質(zhì)體的破碎比例,使原生質(zhì)體在培養(yǎng)過(guò)程中的雜質(zhì)大大減少.

2、材料的種類(lèi)和基因型與原生質(zhì)體的產(chǎn)量和質(zhì)量密切相關(guān).雙單倍體品系無(wú)論在原生質(zhì)體的產(chǎn)量、活力,還是在原生質(zhì)體的植板率上均優(yōu)于野生二倍體,尤其以2-10品系最好,其產(chǎn)量可達(dá)5.83×10<'6>/g鮮葉,活力為61.02﹪,植板率為32﹪;CW-2-3最差,其產(chǎn)量0.31×10<'6>g鮮葉,活力為16.40﹪,植板率為0﹪.基因型不同,所獲得的原生質(zhì)體的褐化指數(shù)也不同,野生二倍體的褐化指數(shù)均比雙單倍體的高.野生二倍體中以CW-2-3的褐化指

3、數(shù)最高,為18.33﹪;雙單倍體中以2-10的褐化指數(shù)最低,為9﹪.但在培養(yǎng)基中添加0.6mg/L的AgNO<,3>,可有效抑制原生質(zhì)體在培養(yǎng)中的褐化現(xiàn)象,從而提高細(xì)胞分裂頻率.NAA或6-BA會(huì)引起馬鈴薯葉肉原生質(zhì)體的褐化,但二者互作時(shí)卻又抑制了原生質(zhì)體的褐化.1.2mg/L的NAA引起的褐化指數(shù)比NAA0.8,1.0mg/L的高,褐化率為14﹪,0.6,0.8mg/L的NAA引起的褐化指數(shù)差異性不顯著;6-BA在0.2,0.4,0.

4、6mg/L三個(gè)水平上差異性均顯著,0.6mg/L6-BA褐化率最高,為17.33﹪.對(duì)CW-2-7的試管苗進(jìn)行2d的低溫預(yù)處理,能夠有效提高原生質(zhì)體的植板率.以4℃的處理效果最好,原生質(zhì)體植板率與15℃和室溫的相比,差異性顯著.對(duì)CW-2-7和2-10進(jìn)行PEG高Ca<'2+>高pH誘導(dǎo)融合時(shí),最適宜的溫度為30℃,最適宜的pH值為9.0;進(jìn)行電融合時(shí)最適宜的電氣參數(shù)為:交流電場(chǎng)強(qiáng)度125V/cm、直流脈沖場(chǎng)強(qiáng)0.75KV/cm、脈沖寬