26752.刀豆愈傷組織建立及愈傷組織中刀豆氨酸的形成

1、^厶、；獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：“：堡圣塹簽字日期：勱屆年∥月肋El學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有

2、關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，向社會公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)。)＼學(xué)位論文作者簽名：磕盤蘢指導(dǎo)教師簽名≤之墮簽字日期：矽聲年莎月加日簽字日期訓(xùn)年p月I刁日學(xué)位論文作者畢

3、業(yè)后去向：工作單位：通信地址：電話：郵編：摘要㈣刪㈣㈣ⅢY17350芝百。刀豆氨酸是一種天然非蛋白氨基酸，和精氨酸的分子結(jié)構(gòu)非常相似，由于其能代替精氨酸被精氨酸t(yī)RNA合成酶誤認(rèn)為是精氨酸而合成到蛋白質(zhì)中，而使含刀豆氨酸的蛋白質(zhì)生理功能有缺陷，從而有良好的抗腫瘤性。刀豆氨酸是蝶形花亞科(Papilionnoidea)和豆科(1eguminosae)植物種子中的可溶性氮的存貯庫，它也被認(rèn)為是一種保護(hù)植物不被病蟲害等侵染的植物天然性次生代謝

4、產(chǎn)物，這是因為刀豆氨酸對某些害蟲表現(xiàn)出一定的毒性作用，由于其具有毒性而被認(rèn)為是一種潛在的殺蟲劑，其優(yōu)點表現(xiàn)為低毒性，對自然界無污染，從它的作用機(jī)制判斷，由于它不損害病蟲的寄生性天敵，因此具有保護(hù)病蟲天敵昆蟲特性。刀豆氨酸的主要來源是通過人工合成和從植物中提取兩種途徑。而植物提取中通過組織培養(yǎng)技術(shù)可以獲得次生代謝產(chǎn)物且一般是成本低，收取率高，對環(huán)境污染少，目前國內(nèi)還未見關(guān)于刀豆愈傷組織的報道，本研究主要是利用刀豆種子誘導(dǎo)愈傷組織，以細(xì)胞鮮

5、重、干重、細(xì)胞相對生長率以及刀豆氨酸含量為考察指標(biāo)，進(jìn)行多因素多水平的優(yōu)化實驗，分析液體懸浮培養(yǎng)過程中生理生化指標(biāo)，且對其中的刀豆氨酸含量進(jìn)行測定，通過研究擬建立一種新的簡便、快速測定刀豆氨酸的方法，研究結(jié)果表明：(1)通過研究2，4二硝基氟苯與刀豆氨酸在pH95硼砂緩沖溶液中反應(yīng)的最佳條件，建立了一種新的、快速簡便的測定刀豆氨酸的方法，即運(yùn)用了分光光度法測定絡(luò)合物在571hill處的吸光度。結(jié)果表明：在50℃水浴30min后，刀豆氨酸

6、與2，4二硝基氟苯發(fā)生顯色反應(yīng)，即形成綠色l：1的穩(wěn)定絡(luò)合物。其最大吸收峰在571nm，表觀摩爾吸光系數(shù)￡=1086104L／(molem)，在1375～22000Itg／mL范圍內(nèi)遵守比爾定律，對應(yīng)線性回歸方程為：y=00051x00682；相關(guān)系數(shù)為：R2=09939。加標(biāo)回收率為9660～10156％范圍之內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1768％之內(nèi)，從而建立了刀豆氨酸簡單、快速測定的新方法。(2)以刀豆種子為材料，誘導(dǎo)刀豆愈傷組織，建立刀豆

7、愈傷組織體系，并進(jìn)一步培養(yǎng)和增殖，同時，測定了不同顏色愈傷組織中刀豆氨酸含量和不同生長時期愈傷組織中刀豆氨酸含量。結(jié)果表明：在MS培養(yǎng)基中可以誘導(dǎo)出淺綠色的刀豆愈傷組織，且在增殖培養(yǎng)基中刀豆愈傷組織的生長特點呈現(xiàn)“S”型曲線模式，生長周期為24d。研究發(fā)現(xiàn)在綠色愈傷組織中刀豆氨酸含量最高為43462Ixg／gFW(細(xì)胞鮮重)，其次是淺綠色的，接著是白色的，含量最少的是褐化的愈傷組織216261tg／gFW。在愈傷組織組織生長過程中刀豆氨