農桿菌介導獲得可去除選擇標記的轉CpTI抗蟲基因玉米植株.pdf

1、該實驗將經過修飾的CpTI抗蟲基因和hyg選擇標記基因分別置于MAR序列之間,使用根癌農桿菌超級雙元載體轉化生產上廣泛應用的優(yōu)良玉米自交系18-599的胚性愈傷組織.共培養(yǎng)3天后,在含HygB的培養(yǎng)基上連續(xù)篩選3代,然后分化得到再生植株.PCR擴增、PCR-Dot blotting和PCR-Southern blotting檢測初步證明目的基因已經整合到再生玉米植株中.此外,該實驗還探討了共培養(yǎng)溫度、共培養(yǎng)培養(yǎng)基的pH及其它因素對轉化效

2、率的影響.實驗結論如下:1.由于受多個因素的影響,液體培養(yǎng)時根癌農桿菌達到對數(shù)生長期的時間不是固定值,對侵染液經常觀察并檢測是一種穩(wěn)定可靠的方法.2.較低的溫度和較低的pH能提高玉米愈傷組織的轉化率在該實驗中沒有得到體現(xiàn),至少對該實驗使用的玉米基因型來說是不正確的.3.從得到的抗性愈傷組織塊數(shù)來看,根癌農桿菌對玉米幼胚胚性愈傷組織的轉化率偏低.4.PCR擴增、PCR-Dot blotting和PCR-Southern檢測初步證明CpTI