根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化獲得含PTA29-Barnase基因的柑橘植株.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化獲得含PTA29Barnase基因的柑橘植株姓名：李東棟申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：鄧秀新2002.11.1柑粕我十T兩介并愈傷縮螺落傳轉(zhuǎn)純款褥雒鞭小靜輯橘稽株投癌農(nóng)轷鎣分嘗愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化獲得含pTA29Barnase基阪的柑爝檀株摘簧‘剃嚆造世界上最踅要的果樹種類之一。在目前豐廿橘生產(chǎn)中，凍害、熱害以及嚴(yán)重的病蟲害蕁在很大程度上阻礙了柑橘種植業(yè)的發(fā)展。消費(fèi)者對于果品質(zhì)

2、量(如無核、大果、商含糖量等)要求的不斷提高和土地面積的減，j、，以及中國加入世界貿(mào)翁組織后中醋柑橘種植業(yè)所面臨的問題都給柑橘育種工作提池了新的研究課題。而簧解決這些問題的根本出路葩：f培育出新的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗瘸、抗逆的稽橘接穗和砧木品種。但是，由于稽稀類植物中存在的珠心聰現(xiàn)象、～些品種中的雌雄性敗育、霆期過長、邋緣有性雜交不親和等待點(diǎn)便通過傳統(tǒng)的有性雜交方式進(jìn)行品種改良迸稚緩侵，效率不高。遺傳轉(zhuǎn)純技術(shù)可以侮澤個(gè)有價(jià)值的基因轉(zhuǎn)入琥有的t

3、|邑庭黼種當(dāng)中，同時(shí)不改變琥有晶稀本身所特有的性狀特征。函詫，可以透過應(yīng)淆遺傳轉(zhuǎn)乞掛術(shù)實(shí)覡抗旱、抗寒、抗鹽堿、抗病等鏊西&々轉(zhuǎn)化，胰焉雹I造新篷釋震，并提承一種新的培育按穗稅醅本品種鵑途徑。17率研究首先建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)柑橘愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化體系，相對于前人常用以上胚軸為外豐贏體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系和以原生質(zhì)體為外植體的電激轉(zhuǎn)化體系，本研究所建立的轉(zhuǎn)化體系具有遺傳背景清晰～致、數(shù)量夫、操作簡便的優(yōu)點(diǎn)。并對其中轉(zhuǎn)化效率的系列因于避行研究。同

4、時(shí)，以柑橘的無核育種為目標(biāo)，在建立的轉(zhuǎn)化體系的簸礎(chǔ)上，將人‘工雄性不育基因pTA29barnase轉(zhuǎn)入三個(gè)多籽品種(伏令夏橙、碰柑、晴柳橙)，中，以鞠锏造新的稽橘雄往不育類墅，并為今后裕橘的無核育年卒提供新的思路和毒李辯。注要的結(jié)鬈如下：1建立了根瘸農(nóng)桿菌介導(dǎo)柑橘愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化體系。以伏令夏橙的胚性愈傷組織為外植體以pCAMBIAl303為質(zhì)粒載體，對轉(zhuǎn)化當(dāng)中影響柑橘轉(zhuǎn)化效率的預(yù)培養(yǎng)方式和時(shí)問、共培養(yǎng)瀨度、AS的肖無進(jìn)行篩選。紿果表明

5、：懸浮培養(yǎng)4d較其它的幾種培養(yǎng)方式獲得更多的抗性愈傷，整異盟著；侵染后共培養(yǎng)中以19“C共培養(yǎng)三天的效果最好(AN=5312)，相比23℃(AN=218)和28℃(AN=275)的共培養(yǎng)溫度，最終的轉(zhuǎn)化效率顯蔫提高；Asx于于稽橘愈傷組織的轉(zhuǎn)化起決定性作用，在沒有As存在的情況下幾乎無法贛衙抗往愈傷組織。2列其有不同染色體背景的三種常用的農(nóng)桿菌菌株(EHAl05、LBA4404、C58)在柑橘轉(zhuǎn)化中的效率差異進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：EH