巨龍竹蔗糖合成酶和鈣調蛋白基因的片段克隆及分析.pdf

1、云南省西南部特產的珍稀竹種巨龍竹(Dendrocalamus sinicus)，是世界上稈型最為高大的竹種，其稈高可達30m以上，徑粗可達30 cm以上。其單位面積產材量比毛竹高5～8倍，是我國南部熱帶及世界熱帶至南亞熱帶地區(qū)推廣前景最為廣闊的優(yōu)良經濟竹種之一。竹筍出土后120天就可以長到35多米高，生物量增加很大。因此，克隆與其生長相關的基因，對于研究巨龍竹速生機理及其優(yōu)良基因的利用具有重要的意義。
　　 鈣調蛋白CAM(Ca

2、lmodulin)是生物細胞內一種重要的調控蛋白，通過其與靶酶的相互作用控制細胞正常的生長發(fā)育及細胞對外界環(huán)境變化的反應。蔗糖合成酶SuSy(Sucrose Synthase)在植物生長發(fā)育過程中有著舉足輕重的作用。葉片光合產物向“庫”器官運輸的主要形態(tài)是蔗糖，而蔗糖合成酶是蔗糖進入各種代謝途徑所必需的關鍵酶之一。
　　 本文首先根據已知蔗糖合成酶基因SuSy保守區(qū)域設計兼并引物，采用RT-PCR方法克隆獲得巨龍竹生長相關基因蔗

3、糖合成酶SuSy的保守區(qū)域片段SUS，并用生物信息學的方法進行序列分析。
　　 同時根據已知鈣調蛋白CAM基因保守區(qū)域設計兼并引物，采用RT-PCR方法從巨龍竹葉片RNA中擴增了鈣調蛋白CAM基因的保守區(qū)域片段(CAM260和CAM354)，對所獲得的片段進行序列分析。
　　 結果如下：
　　 1)本研究獲得了巨龍竹蔗糖合成酶基因SuSy保守區(qū)域片段序列SUS，其長度為618bp。BLAST分析表明，該保守區(qū)域片

4、段與已知蔗糖合成酶基因高度同源，可以初步認為其為巨龍竹蔗糖合成酶基因SuSy的保守區(qū)域片段。
　　 2)獲得巨龍竹鈣調蛋白基因CAM保守序列(CAM260和CAM354)。長度分別為260bp和354bp。BLAST分析表明，CAM260的核苷酸序列并沒有與其它植物的CAM基因在同一組中，而在粳稻染色體(Oryza sativa L.ssp.japonica)的序列中，相似性達84％以上。CAM354片段并未找到與其相似的基因。