青天葵分枝發(fā)育相關(guān)基因NfLs的克隆與表達分析.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明： 所呈交的學(xué)位論文，是個人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)馘文儲簽名莘遞企日期： 2 0 1 4 年 6 月 3 日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保

2、留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。( 保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文導(dǎo)師簽名——6 月 3 日青天葵分枝發(fā)育相關(guān)基因U f L s 的克隆與表達分析專業(yè)：中藥學(xué)碩士研究生：梁凌玲導(dǎo)師：何瑞研究員摘 要分枝是植物為了適應(yīng)環(huán)境而表現(xiàn)出的生物性狀

3、，分枝的多少直接影響植物的生物量和結(jié)實量。由于頂端優(yōu)勢的存在，側(cè)芽的生長被抑制。研究表明，植物的分枝發(fā)育受到多種植物激素的調(diào)節(jié)。相關(guān)分枝基因在不同物種中的保守性，使其在藥用植物中的克隆研究成為可能，如蘭科植物石斛蘭中，克隆得到抑制分生組織的生長、促進莖尖分生組織的形成和早熟開花的D O H l 。研究植物分枝相關(guān)基因，不僅可以增加對植物發(fā)育及其機理的了解，還可以為獲得多分枝植株，增加藥用植物的產(chǎn)量，緩解某些藥用植物資源短缺問題，如瀕危的

4、嶺南道地藥材青天葵等提供理論基礎(chǔ)。《廣東省中藥材標(biāo)準》收錄的青天葵來源于蘭科植物毛唇芋蘭[ N e r v i l i af o r d i i( H a n c e ) S c h l t r ．】的干燥全草。主要分布于兩廣、海南等地區(qū)。具有清熱解毒、散瘀止痛、潤肺止咳等功效。主要用于小兒呼吸道疾病、小兒疳積、跌打損傷等。由于青天葵本身繁殖系數(shù)較低，市場需求量大，加上人類的過度采挖，其野生資源瀕臨滅絕，而人工栽培遠遠不能滿足市場需求，

5、因此擴大青天葵的藥用資源亟不可待。本論文通過研究從前期建立的青天葵轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中發(fā)掘到的一個分枝發(fā)育相關(guān)基因N f L s ，期望為打破青天葵正常情況下每個球莖只長一片葉子的現(xiàn)狀奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容包括：( 1 ) 為了篩選適合青天葵葉片總R N A 的提取方法，本文采用C T A B 法、S D S法、R N e a s y P l a n tM i n iK i t 法、R N A i s oP l u s 法、R N A i s

6、of o rP o l y s a c c h a r i d e —r i c hP l a n tT i s s u e 法5 種方法，并結(jié)合4 類抽提試劑，分別提取青天葵葉片總R N A ，得到適合青天葵葉片總R N A 的提取方法：R N A i S O P l u s 法。( 2 ) 基于青天葵轉(zhuǎn)錄組U n i g e n e s 數(shù)據(jù)庫，篩選青天葵分枝發(fā)育相關(guān)的U n i g e n e s ，其中U n i g e n e

7、 3 7 9 4 8 與番茄促進分枝的基因厶同源。以U n i g e n e 3 7 9 4 8 序列為依據(jù)，采用R A C E 技術(shù)獲得青天葵分枝發(fā)育相關(guān)基因N f L sc D N A 全長序列，該序列包含了1 1 9 1 b p 的開放閱讀框，共編碼3 9 6 個氨基酸。利用N C B IB L A S T P 功能對N f L s 的蛋白功能域進行預(yù)測，其歸屬于G R A S 家族。采用s e q u i n 軟件向G e n