香菇子實(shí)體發(fā)育相關(guān)基因的克隆及分析.pdf

1、香菇(Lentinulaedodes)子實(shí)體的形成是香菇整個(gè)生活史中最復(fù)雜也是最重要的發(fā)育過程，需要環(huán)境、遺傳、生理等多個(gè)因素相互作用。研究子實(shí)體發(fā)育相關(guān)基因一直是食用菌領(lǐng)域中個(gè)重要的研究內(nèi)容。正常的香菇子實(shí)體分化形成菌蓋、菌褶和菌柄。
　　 香菇球形子實(shí)體是在湖北省隨縣三里崗鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)的香菇正常子實(shí)體中的變異類型，整個(gè)子實(shí)體成球形，菌蓋不開傘，菌柄不伸長，菌褶未見分化。經(jīng)過組織分離獲得純培養(yǎng)菌種，進(jìn)行再次栽培試驗(yàn)，仍然長出球形子實(shí)

2、體。本試驗(yàn)以子實(shí)體為球形的香菇菌株為材料，利用DDRT-PCR技術(shù)克隆及分析了該菌株在菌絲、原基、子實(shí)體三個(gè)階段基因。試驗(yàn)采用3條錨定引物和26條隨機(jī)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中只有14條隨機(jī)引物可以擴(kuò)增出重復(fù)性好、數(shù)量多且清晰地條帶，擴(kuò)增結(jié)果以PA和Pc為錨定引物反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA模板最好。得到穩(wěn)定的差異條帶41條，經(jīng)過反向Northern點(diǎn)雜交驗(yàn)證出陽性差異片段17條，假陽性率為58.54％。克隆測序后在Genbank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BL

3、AST同源分析，17條差異片段中有7條片段與已知的基因序列和蛋白序列具有較高的相似性。
　　 差異片段GP20-540與香菇LephrA基因AB279630.1具有98％的相似性，推測其可能是編碼藍(lán)光受體A的基因，參與類胡蘿卜素的生成、生物鐘的重設(shè)等功能；差異片段APlo-302編碼的蛋白與泉古菌(unculturedcrenarchaeote)45-H-12歸位內(nèi)切酶I-ApelI具有38％的相似性，推測其可能和蛋白質(zhì)剪接相關(guān)

4、；差異片段CP16-324編碼的蛋白與土曲霉(Aspergillusterreus)天冬氨酸激酶具有43％的相似性，推測其可能編碼天冬氨酸激酶，參與賴氨酸的生物合成；差異片段CP18-394編碼的蛋白與煙曲霉(Aspergillusfumigatus)的熱激蛋白90輔助分子伴侶序列具有41％的相似性，推測其具有抗逆以及作為分子伴侶維持蛋白穩(wěn)定和激酶活性；差異片段GP7-502編碼的蛋白與雙色蠟?zāi)?Laccariabicolor)的糖苷水

5、解酶家族2蛋白具有50％的相似性，推測其可能和糖代謝有關(guān)；差異片段CP20-321編碼的蛋白與靈芝(Ganodermalucidum)的金屬硫蛋白具有54％的相似性，推測其可能在重金屬解毒、金屬離子運(yùn)輸及動(dòng)態(tài)平衡的維持、離子代謝以及活性氧的清除等方面起作用；差異片段AP2l-479編碼的蛋白與灰蓋鬼傘(Coprinopsiscinerea)的假定蛋白CClG-_01848具有60％的相似性，但該蛋白的具體功能有待研究。進(jìn)一步比較香菇正常