龍眼SVP基因的克隆及功能研究.pdf

1、本試驗(yàn)以‘四季蜜’、‘立冬本’龍眼嫁接新梢及‘紅核子’龍眼葉芽為材料，研究不同龍眼品種中SVP同源基因序列的差異（包括基因序列的可變剪切）及表達(dá)差異，探究龍眼SVP同源基因在龍眼的成花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中（包括花芽分化和幼年期調(diào)控）的作用。本試驗(yàn)主要獲得了以下研究結(jié)果：
　　1．熒光定量PCR驗(yàn)證龍眼13個(gè)成花調(diào)控基因在‘四季蜜’和‘立冬本’嫁接新梢中表達(dá)的差異。結(jié)果表明，GI與FKF1基因在‘四季蜜’中均表達(dá)升高，SVP、FLC、EMF2

2、的同源基因在‘四季蜜’中表達(dá)降低。龍眼中的TFL1同源基因TFL1(6027)與TFL1(6475)變化趨勢(shì)不同，TFL1(6027)在‘四季蜜’中的表達(dá)稍高于‘立冬本’，而TFL1(6475)在‘四季蜜’中表達(dá)降低。LFY、 AP1與SOC1基因在兩個(gè)品種中的表達(dá)差異不明顯。
　　2．以‘四季蜜’龍眼嫁接新梢及‘紅核子’龍眼葉芽為試驗(yàn)材料，克隆龍眼中的SVP同源基因，得到‘四季蜜’龍眼中SVP645基因的7個(gè)不同拷貝序列、SVP

3、2719的7個(gè)可變剪切序列，‘紅核子’龍眼中SVP645基因的7個(gè)不同拷貝序列、SVP2719的4個(gè)可變剪切序列。分析各序列，發(fā)現(xiàn)龍眼 SVP645基因的大多數(shù)拷貝在‘紅核子’和‘四季蜜’中序列存在差異；SVP2719基因在‘四季蜜’和‘紅核子’中的堿基序列基本無(wú)差異，編碼區(qū)氨基酸序列完全一致。
　　3．熒光定量PCR分析兩個(gè)龍眼SVP同源基因在‘紅核子’品種中花芽分化過(guò)程的表達(dá)。結(jié)果顯示，在1月份龍眼花芽開始形態(tài)分化的時(shí)候，SV

4、P645基因的表達(dá)達(dá)到頂峰，而SVP2719基因表達(dá)卻開始下降，表明 SVP645與 SVP2719基因可能具有不同的功能，SVP2719功能可能與抑制花芽分化有關(guān)。
　　4．選擇‘四季蜜’中SVP2719的S-1和S-6號(hào)基因序列構(gòu)建重組表達(dá)載體，根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化本氏煙草。結(jié)果發(fā)現(xiàn)龍眼 SVP2719-S1基因使煙草的花蕾形狀發(fā)生了變化，花蕾畸形，不能正常成花；SVP2719-S6基因使煙草的花朵形狀發(fā)生了變化，花瓣畸形，但花