梨病毒超低溫脫除技術(shù)的改進(jìn)及帶病毒與脫毒梨離體植株生長(zhǎng)特性比較.pdf

1、栽培梨（Pyrusspp.）普遍潛帶蘋果莖溝病毒(Applestemgroovingvirus，ASGV)、蘋果莖痘病毒(Applestempittingvirus，ASPV)和蘋果褪綠葉斑病毒(Applechloroticleafspotvirus，ACLSV)，感染病毒的梨樹長(zhǎng)勢(shì)變?nèi)?，?dǎo)致果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量的降低。培育和栽培無病毒苗木是防治梨病毒病的重要方法。本研究中，通過變溫?zé)崽幚斫Y(jié)合超低溫處理進(jìn)行病毒脫除試驗(yàn)，并探討利用梨離體植株嫩

2、枝嫁接技術(shù)進(jìn)行無病毒苗木的繁殖，同時(shí)系統(tǒng)比較帶病毒與脫毒梨離體植株的生長(zhǎng)特性。研究結(jié)果對(duì)于建立和完善我國(guó)梨的脫毒技術(shù)體系具有指導(dǎo)和應(yīng)用意義。
　　1.對(duì)采自遼寧興城的4個(gè)梨品種（京白梨、蘋果梨、色爾克甫和庫(kù)爾勒香梨）休眠芽進(jìn)行分化培養(yǎng)，以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)IBA、6-BA和NAA三種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度進(jìn)行優(yōu)化，分別篩選對(duì)4個(gè)梨品種的最適分化培養(yǎng)基。結(jié)果表明，不同梨品種最適分化培養(yǎng)基組成有所不同。6-BA為分

3、化培養(yǎng)所必須，濃度在1mg/L-4mg/L之間，IBA對(duì)其中3個(gè)品種（京白梨、色爾克甫和庫(kù)爾勒香梨）的分化培養(yǎng)具有促進(jìn)作用，但所需濃度較低，在0.2mg/L-0.4mg/L之間;而NAA只對(duì)1個(gè)梨品種（京白梨）的分化培養(yǎng)具有促進(jìn)作用。
　　2.以分化培養(yǎng)所獲得的帶有ASPV的“庫(kù)爾勒香梨”離體植株為材料進(jìn)行變溫?zé)崽幚斫Y(jié)合超低溫處理脫毒試驗(yàn)，變溫?zé)崽幚頃r(shí)間分為20d、30d和40d三個(gè)時(shí)間段。同時(shí)，對(duì)試驗(yàn)中不同處理的莖尖進(jìn)行石蠟切片

4、，分析莖尖細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)。以帶有ASGV的“金水2號(hào)”離體植株為材料進(jìn)行化學(xué)（病毒醚25μg/mL）處理結(jié)合超低溫處理脫毒試驗(yàn)，病毒醚處理時(shí)間為20d、30d和40d三個(gè)時(shí)間段。試驗(yàn)結(jié)果顯示，變溫?zé)崽幚碛欣凇皫?kù)爾勒香梨”的生長(zhǎng)與增殖，并能在一定程度上脫除庫(kù)爾勒香梨所帶ASPV(14％-87％)，而凡是經(jīng)過超低溫處理的莖尖在恢復(fù)培養(yǎng)過程中出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，未能獲得成活的脫毒植株。經(jīng)過切片觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過變溫?zé)崽幚砝媲o尖細(xì)胞在一定程度上增大，且

5、經(jīng)過變溫?zé)崽幚磉^的莖尖再進(jìn)行超低溫處理相比單一超低溫處理的莖尖，其莖尖細(xì)胞組織的破壞更加嚴(yán)重。化學(xué)處理結(jié)合超低溫處理脫毒試驗(yàn)中，變溫?zé)崽幚?0d能完全脫除“金水2號(hào)”所帶ASGV，脫毒效率高于30d(50％)和20d(50％)。而超低溫處理對(duì)該病毒沒有顯示出脫除效果(0％)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，切取1mm莖尖的成活率與原始植株的健壯程度有關(guān)。
　　3.以“圓黃”和“雪花梨”兩個(gè)梨品種幼齡帶毒和脫毒離體植株為材料，分別測(cè)定其SOD活性、丙二醛

6、含量、可溶性蛋白含量和葉綠素含量等4項(xiàng)生理生化指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明，幼齡帶毒和脫毒離體植株SOD活性、丙二醛含量和葉綠素含量三項(xiàng)指標(biāo)無明顯差別，可溶性蛋白含量不同品種呈現(xiàn)相反的結(jié)果。從以上結(jié)果推測(cè)可能病毒在梨離體植株幼齡階段的影響較弱。
　　4.以沙梨品種“豐水”、“金水2號(hào)”和西洋梨品種“紅貝蕾莎”、“康弗侖斯”為試驗(yàn)材料，嘗試采用離體植株嫩枝嫁接技術(shù)進(jìn)行苗木繁殖。試驗(yàn)結(jié)果表明“豐水”嫁接成活率最高，達(dá)到80％，“金水2號(hào)”和“紅