匍匐翦股穎離體再生體系的建立及玻璃化超低溫保存技術(shù)研究.pdf

1、匍匐翦股穎（AgrostisstoloniferaL.）是一種很重要的多年生冷地型草坪草，具有耐修剪、觀賞性高等優(yōu)點(diǎn)，常用于高爾夫球場(chǎng)果嶺及高檔草坪中。本研究探究了誘導(dǎo)匍匐翦股穎愈傷組織的最佳條件，建立了高頻再生體系。并對(duì)匍匐翦股穎愈傷組織進(jìn)行了玻璃化超低溫保存，為匍匐翦股穎細(xì)胞工程和基因工程奠定了理論和實(shí)踐基礎(chǔ)，同時(shí)對(duì)匍匐翦股穎屬種質(zhì)資源長(zhǎng)期保存提供了依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1.建立了匍匐翦剪股穎再生體系：分別以A-4、A-

2、1、帕特三個(gè)品種成熟種子為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，其中品種A-4的愈傷組織誘導(dǎo)率最高，可達(dá)74.7%；2，4-D是影響愈傷組織誘導(dǎo)的最重要激素，以4mg/L為宜，愈傷組織誘導(dǎo)率為73.2%；在MS+4mg/L2，4-D+0.3mg/L6-BA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L中可顯著提高愈傷組織誘導(dǎo)率，愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)78.6%；繼代培養(yǎng)條件：MS+2mg/L2，4-D+0.1mg/L6-BA+0.3mg/LABA+500mg/L水解酪蛋

3、白中對(duì)愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng)，胚性愈傷組織發(fā)生率可達(dá)36.8%；芽分化：在基本培養(yǎng)基中添加2mg/L6-BA，芽的分化率在80%以上；根的誘導(dǎo)：在1/2MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/LNAA； 2.探索了玻璃化超低溫保存體系：將繼代兩次的愈傷組織在4℃低溫度下預(yù)培養(yǎng)5天，常溫下用裝載液（2mol/l甘油+0.4mol/l蔗糖）過(guò)渡10min，再于0℃下用玻璃化溶液PVS2處理50min，換成新鮮的PVS2迅速投入液氮中保存一小時(shí)以上