雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的原核表達.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(InfectiousBursalDisease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus，IBDV)引起的以侵害雛雞淋巴組織，特別是中樞免疫器官——法氏囊為主要特征的傳染病，每年給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。該病不僅會造成機體組織損傷，還會引起免疫抑制，降低機體的免疫防御能力，從而導致疫苗免疫接種失敗。近年來，由于各地出現(xiàn)的IBDV變異株和超強毒株，現(xiàn)行疫苗免疫不足以應對這些

2、新出現(xiàn)的挑戰(zhàn)，造成IBD的流行情況呈現(xiàn)更為復雜的態(tài)勢，給該病的防控造成較大困難。IBDV的VP2蛋白是該病毒粒子的主要結構蛋白，包含主要保護性抗原表位，因此VP2蛋白的重組表達和相關研究能夠為IBDV的防治以及新型亞單位疫苗的開發(fā)提供有益的技術支撐和理論依據(jù)。
　　本文參照IBDV-VP2標準基因序列，利用JavaCodonAdaptationTool(JCAT)軟件對IBDV-B87株堿基密碼子進行優(yōu)化，合成目的基因，目的基因與

3、pUC-57克隆載體連接為pUC57-VP2，雙酶切pUC57-VP2和pET28a，提取目的基因并將目的基因與pET-28a表達載體連接，構建重組表達質(zhì)粒pET28a-VP2，將其轉化至BL21(DE3)Plyss表達宿主菌，用IPTG進行誘導表達。SDS-PAGE分析表明目的蛋白出現(xiàn)在48ku處，并且主要以可溶性表達為主，與該蛋白理論上的分子量大小一致，并且目的蛋白表達量約占總蛋白表達量的10％。Westernblot實驗證明VP2