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1、傳染性法氏囊病毒VP2基因的原核表達(dá)以及檢測血清抗體的間接ELISA方法的建立ProkaryoticExpressionoftheIBDVVP2geneandtheEstablishmentofanindirectELISAfortheDetectionofAntibodiesagainstInfectiousBursalDisease研究生：張華專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師：彭大新教授陳義平研究員陳素娟副教授揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2014年6月?lián)P州
2、大學(xué)碩士學(xué)位論文體形式存在，其中VP2全長蛋白大小約45kDa，表達(dá)量約占茵體蛋白的11％，VP2上半段蛋白大小約為27kDa，表達(dá)量約占菌體蛋白的301％。經(jīng)過鎳柱親和層析后，獲得純化的重組VP2全長蛋白和VP2上半段蛋白，濃度分別為17mg／mL和25mg／mL。Westernblot試驗證明這兩種重組蛋白均具有較好的免疫反應(yīng)性，能與IBDV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。二檢測雞血清中IBDV抗體的間接ELISA方法的建立通過方陣試驗確定
3、純化的重組VP2上半段蛋白作為檢測用抗原，每孔包被100ng，待檢血清的最佳稀釋度為1：100。通過對各種條件的優(yōu)化，待檢血清和酶標(biāo)二抗的孵育時間均定為30min，酶標(biāo)二抗的工作濃度選擇為1：2500稀釋。最后的判定標(biāo)準(zhǔn)為：當(dāng)待檢血清OD450506xODPO4xODN(ODP代表陽性對照血清OD450平均值，ODN代表陰性對照血清OD450平均值)判定為陰性，反之則判為陽性。對該方法的特異性檢測試驗中，H5、H7、H9亞型禽流感病毒陽
4、性血清以及新城疫病毒陽性血清均被檢測為陰性，說明該方法特異性良好。利用所建立的間接ELISA檢測方法(VP2ELISA)和IDEXX公司的IBDV血清抗體ELISA檢測試劑盒平行檢測l56份臨床雞血清樣品。以IDEXX公司的ELISA試劑盒檢測結(jié)果作為參照，本實驗所建立的間接ELISA檢測方法的敏感性、特異性和符合率分別為9565％(110／115)、9024％(37／41)和9423％(147／156)，表明所建立的間接ELISA方法
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