豬繁殖與呼吸綜合征RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、為了解豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)在廣西區(qū)的流行情況,本研究根據(jù) GenBank中所發(fā)表的PRRSV美洲型經(jīng)典株、高致病性變異株及歐洲株的Nsp2基因序列,設(shè)計(jì)并合成了兩對(duì)特異性引物,建立了兩種RT-PCR檢測(cè)方法。第一種方法利用引物Eur7/Eur8從PRRSV的美洲型和歐洲型毒株中分別擴(kuò)增出666bp和572bp的片段;第二種方法利用引物Pa/Pb從PRRSV美洲型的經(jīng)典株和高致病性變異株中擴(kuò)增出523bp和433bp片段。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)

2、證,這兩種方法對(duì)豬瘟病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬流感病毒、口蹄疫 A型、O型、亞 I型病毒擴(kuò)增結(jié)果均為陰性;引物Eur7/Eur8能檢測(cè)出的最小 RNA濃度為7.68×10-3μg/ml,引物 Pa/Pb為7.76×10-5μg/ml。實(shí)驗(yàn)證明建立的兩種 RT-PCR方法具有良好的特異性、敏感度和重復(fù)性,第一種方法能快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)并鑒別出PRRSV美洲型和歐洲型毒株,第二種方法可以區(qū)分美洲型經(jīng)典株和高致病性變異株,兩

3、種方法聯(lián)合使用可以作為PRRSV臨床診斷、病料檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查的有效方法。
　　應(yīng)用所建立的兩種RT-PCR方法對(duì)2012年2月至2014年1月兩年間廣西區(qū)內(nèi)11個(gè)地市,76個(gè)豬場(chǎng)的2355份病料進(jìn)行了病原學(xué)檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示,共有324份PRRSV陽(yáng)性,總陽(yáng)性率為13.76％,其中美洲型經(jīng)典株77份,陽(yáng)性率為為3.27%,變異株247份,陽(yáng)性率為10.49%,未檢測(cè)到歐洲株。11個(gè)地市中除防城港外均有檢測(cè)到PRRSV,且大部分