豬繁殖與呼吸綜合征病毒四種檢測方法的比較.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸征病毒(PRRSV)引起的高度接觸性病毒傳染病，以妊娠母豬、公豬生殖障礙及仔豬呼吸障礙為特征的疾病，是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的疾病之一。該病毒PRRSV可分為美洲型和歐洲型，我國現(xiàn)存的PRRSV大多數(shù)為美洲型PRRSV。
　　 本研究建立了四種美洲型病毒的病原學(xué)診斷方法，并對它們進(jìn)行了系統(tǒng)分析。
　　 研究表明N蛋白是PRRSV病毒粒子中含量最多的病毒蛋白，也是免疫原性最強(qiáng)的蛋白

2、。本研究應(yīng)用抗PRRSV N多抗，初步建立了PRRSV ELISA和PRRSV IFA檢測方法，用于病毒的檢測。本實(shí)驗(yàn)所建立的ELISA方法，最佳病毒包被稀釋度為1/20(此時(shí)包被的病毒量為0.093μg/μL)，最佳的一抗(抗PRRSV多克隆抗體)稀釋度為1/400。在ELISA特異性實(shí)驗(yàn)中，只有PRRSV病毒樣品，結(jié)果為陽性，豬細(xì)小病毒陽性樣品、豬偽狂犬病毒樣品、豬圓環(huán)病毒樣品，結(jié)果均為陰性。在臨床樣品的檢測過程中，ELISA方法的

3、檢出率為20％，與標(biāo)準(zhǔn)通用的RT-PCR檢測結(jié)果要高；IFA方法在接種300個(gè)TCID50細(xì)胞毒/100μL情況下，最佳一抗二抗稀釋倍數(shù)分別為1/400，1/400，此方法在臨床樣品的檢測過程中，檢出率為7.5%，與標(biāo)準(zhǔn)檢測結(jié)果差距較大，表明此方法并不是很敏感。
　　 本實(shí)驗(yàn)參照美洲型PRRSV NSP2基因序列，設(shè)計(jì)RT-PCR引物和RT-LAMP引物，建立RT-PCR和RT-LAMP檢測方法，用于PRRS病毒的檢測與區(qū)分。在

4、靈敏性實(shí)驗(yàn)中，我們對梯度稀釋的病毒RNA(從病毒液中提取的)，分別進(jìn)行檢測，結(jié)果可知該RT-LAMP檢測方法的敏感性比普通的RT-PCR高103-104倍。本實(shí)驗(yàn)所建立的RT-LAMP方法最低檢測限量為7.9×10-11μg/μL和8.3×10-10μg/μL病毒RNA，而RT-PCR方法最低檢測限量為7.9×10μg/μL和8.3×10-7μg/μL病毒RNA。在特異性實(shí)驗(yàn)中，兩種檢測方法可以準(zhǔn)確的區(qū)分PRRSV和其他豬病病毒，更能準(zhǔn)