大黃魚(yú)標(biāo)志技術(shù)研究及耐低溫性狀相關(guān)SSR標(biāo)記篩選.pdf

1、大黃魚(yú)是我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，由于酷漁濫捕，大黃魚(yú)資源嚴(yán)重枯竭，已到了瀕臨滅絕的地步，目前我國(guó)大黃魚(yú)種質(zhì)面臨著生長(zhǎng)變緩，抵抗力變差，耐受性變?nèi)酰瑐€(gè)體變小和性成熟提早等各種種質(zhì)退化的問(wèn)題，大黃魚(yú)在浙江地區(qū)無(wú)法自然過(guò)冬對(duì)浙江大黃魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)造成致命打擊，大黃魚(yú)種質(zhì)資源改良選育迫在眉睫。本研究通過(guò)群體選育方法，以岱衢洋大黃魚(yú)幼魚(yú)（耐低溫品系F2代儲(chǔ)備親魚(yú)）為研究對(duì)象，初步探索了熒光和PIT兩種傳統(tǒng)標(biāo)志技術(shù)對(duì)大黃魚(yú)生長(zhǎng)狀況的影響，得到了較優(yōu)標(biāo)志方

2、法。另一方面，對(duì)耐低溫品系F2代儲(chǔ)備親魚(yú)進(jìn)行人工低溫脅迫實(shí)驗(yàn)，初步篩選出F2代大黃魚(yú)耐低溫群體，利用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)，對(duì)低溫耐受群體和非耐受群體進(jìn)行遺傳多樣性比較分析，并篩選出1個(gè)與耐低溫性狀相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)。通過(guò)傳統(tǒng)標(biāo)志技術(shù)和現(xiàn)代化基因標(biāo)記技術(shù)手段的結(jié)合研究，為耐低溫品系后續(xù)的大黃魚(yú)群體選育及培育研究提供了較優(yōu)的標(biāo)志方法和高效的分子標(biāo)記檢測(cè)手段。主要研究?jī)?nèi)容及成果如下:
　　1、大黃魚(yú)VIE與PIT標(biāo)志的初步研究
　　群

3、體選育目標(biāo)群體較多，在群體數(shù)量較多時(shí)（大于兩個(gè)群體），標(biāo)志技術(shù)的使用不僅可有效保證選育外界環(huán)境一致，保證選育結(jié)果的有效性，還可以減少所使用的養(yǎng)殖設(shè)施和人工成本，降低選育工作強(qiáng)度，提高效率。2013年4月，通過(guò)對(duì)樣本大黃魚(yú)進(jìn)行VIE標(biāo)和PIT標(biāo)處理，每組400尾，設(shè)置空白對(duì)照組（無(wú)標(biāo)志、400尾），共3組1200尾大黃魚(yú)。結(jié)果顯示:VIE與PIT對(duì)大黃魚(yú)的體重、體長(zhǎng)生長(zhǎng)狀況影響均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。而在成活率的比較中，VIE比PI

4、T標(biāo)志表現(xiàn)結(jié)果好且差異顯著(P＜0.05)，兩者脫標(biāo)率均較低且無(wú)顯著差異(P＞0.05)。VIE標(biāo)志對(duì)大黃魚(yú)的存活生長(zhǎng)影響比PIT小，前者操作簡(jiǎn)易、成本較低，僅不到后者12.5％，因此，本試驗(yàn)后期工作均采用VIE標(biāo)記大黃魚(yú)。
　　2、遺傳多樣性分析及耐低溫性狀相關(guān)SSR標(biāo)記的篩選
　　2013年1月對(duì)3000余尾體長(zhǎng)9.2～11.5cm岱衢洋大黃魚(yú)幼魚(yú)進(jìn)行人工低溫脅迫實(shí)驗(yàn)，以低溫耐受組和非低溫耐受組2個(gè)F2代群體各50個(gè)個(gè)體

5、為研究對(duì)象，分析了群體耐低溫性狀的遺傳差異。結(jié)果顯示:13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)在2個(gè)岱衢洋大黃魚(yú)群體中共檢測(cè)到109個(gè)等位基因，觀測(cè)等位基因85個(gè)，平均有效等位基因6.49個(gè)，觀測(cè)雜合度0.89，平均期望雜合度0.85，2個(gè)群體的平均多態(tài)信息含量值為0.81，全部為高度多態(tài)，表明13個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在所選育的岱衢洋大黃魚(yú)群體中均表現(xiàn)出較高的多態(tài)性，群體的遺傳多樣性比較豐富，可以作為良好的育種材料。耐低溫性狀相關(guān)微衛(wèi)星標(biāo)記的研究顯示，標(biāo)記LYC0

6、015在兩組樣品中共擴(kuò)增出5個(gè)等位基因(片段大小分別為112、110、108、106和104 bp)，其中LYC0015112bp等位基因在低溫耐受組的出現(xiàn)頻率達(dá)48％，而在正常對(duì)照組中的頻率為零，表明該等位基因?qū)︶丰檠蟠簏S魚(yú)溫度特性較為敏感，可能與某種耐低溫基因存在一定的連鎖關(guān)系，這一結(jié)果可以為岱衢洋大黃魚(yú)今后耐低溫群體的選育研究提供基礎(chǔ)資料。本研究對(duì)研究所培育的耐寒和非耐寒群體遺傳多樣性SSR分析結(jié)果表明，2個(gè)大黃魚(yú)養(yǎng)殖群體的多態(tài)信