冷應(yīng)激對產(chǎn)蛋雞氧化損傷機(jī)制的研究.pdf

1、環(huán)境溫度是蛋雞生存重要環(huán)境因素之一，低溫環(huán)境對蛋雞生產(chǎn)造成了嚴(yán)重破壞。低溫環(huán)境刺激下產(chǎn)生冷應(yīng)激，一方面造成了飼料利用效率降低，另一方面影響了蛋雞的生產(chǎn)狀態(tài)，但是冷應(yīng)激對蛋雞的負(fù)面作用機(jī)制尚不清楚。本文主要從低溫環(huán)境對產(chǎn)蛋雞體溫，能量代謝指標(biāo)，線粒體質(zhì)子通道(avUCP、ANT) mRNA表達(dá)以及對抗氧化水平、應(yīng)激指標(biāo)等方面的影響來研究冷應(yīng)激對于氧化損傷機(jī)制。
　　 1.本試驗選擇40周齡、健康、體重相近、個體差異較小的海蘭灰商品

2、蛋雞40只，平均體重為1.415Kg。隨機(jī)分成8組（即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ）每組5個重復(fù)，其中Ⅰ-Ⅶ為試驗組（選擇Ⅰ-Ⅴ為冷應(yīng)激組，Ⅵ、Ⅶ為恢復(fù)組），Ⅷ為對照組。選擇試驗組Ⅶ和對照組Ⅷ進(jìn)行體溫試驗，各組預(yù)先放入到密閉室內(nèi)（溫度:21±2℃，相對濕度:75±4％，風(fēng)速小于0.4m/s）預(yù)處理12 h。試驗開始時將試驗組雞只迅速轉(zhuǎn)入室外，對照組Ⅷ也同時開始試驗。冷應(yīng)激組Ⅰ-Ⅴ按照順序依次在室外低溫刺激2h、4h、6h、8h、10h

3、，恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ在冷應(yīng)激10h后迅速轉(zhuǎn)入到密閉室內(nèi)分別恢復(fù)2h，4h。室外冷應(yīng)激環(huán)境為河北省保定市，2012年1月19號河北農(nóng)業(yè)大學(xué)標(biāo)本園19:30到次日5:30室外環(huán)境（平均溫度:-8.68±2.12℃平均相對濕度:76.05±18.59％平均風(fēng)速:0.42±0.01 m/s），體溫測定以30分鐘為周期進(jìn)行翅下溫度測定和直腸溫度測定。測定顯示冷應(yīng)激環(huán)境下試驗組Ⅶ較對照組Ⅷ體溫（直腸溫度、翅下溫度）降低，而在恢復(fù)過程中試驗組Ⅶ體溫升高并超

4、出對照組Ⅷ。
　　 2.試驗分組同試驗1，對血清樣品進(jìn)行測定結(jié)果顯示:(1)能量代謝水平:應(yīng)激組Ⅴ葡萄糖水平升高顯著(P＜0.05)，乳酸水平顯著降低(P＜0.01)，應(yīng)激組Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ丙酮酸水平顯著升高(P＜0.05)，應(yīng)激組乳酸丙酮酸比值Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ顯著下降(P＜0.01)，且恢復(fù)組Ⅵ相對于應(yīng)激組Ⅴ顯著升高(P＜0.01)。應(yīng)激組Ⅲ血清中甘油三酯水平相對于對照組Ⅷ和恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ顯著升高，差異極顯著(P＜0.01);恢復(fù)組Ⅵ與應(yīng)激

5、組Ⅲ、Ⅳ相比顯著降低(P＜0.01)。應(yīng)激組Ⅲ中游離脂肪酸水平相對于對照組以及恢復(fù)組Ⅵ、Ⅷ顯著增加(P＜0.05)。應(yīng)激組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組血清尿酸水平相對于對照組升高，且差異極顯著(P＜0.01)。(2)激素水平:與對照組Ⅷ相比應(yīng)激組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ以及恢復(fù)組Ⅵ組中血清中胰島素水平顯著升高(P＜0.05)，應(yīng)激組Ⅰ、恢復(fù)組Ⅶ胰島素水平與對照組差異不顯著(P＞0.05)。應(yīng)激組Ⅳ中血清中T3水平相對與對照組Ⅷ相比顯著升高(P＜0.05)，恢

6、復(fù)組Ⅵ相對于應(yīng)激組Ⅳ、Ⅴ血清T3水平顯著下降(P＜0.05)。應(yīng)激組Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組中血清T4水平相對于對照組Ⅷ與恢復(fù)組Ⅶ顯著升高(P＜0.05)。相對于對照組Ⅷ應(yīng)激組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，以及恢復(fù)組Ⅵ胰島素抵抗指標(biāo)HOMA-IRI水平顯著升高(P＜0.05)。相對應(yīng)的胰島素敏感指標(biāo)ISI與對照組Ⅷ與恢復(fù)組Ⅶ相比應(yīng)激組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ以及恢復(fù)組Ⅵ顯著降低(P＜0.05)。
　　 3.試驗步驟同試驗2，對胸肌和腿肌樣本進(jìn)行測定結(jié)果顯示:在冷應(yīng)

7、激環(huán)境下應(yīng)激組Ⅴ，恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ相對于對照組Ⅷ胸肌組織中avUCP mRNA水平顯著升高(P＜0.05)，而其他應(yīng)激組相對于對照組變化不顯著(P＞0.05)。腿肌組織中應(yīng)激組Ⅳ、Ⅴ，恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ相對于對照組ⅧavUCP mRNA水平顯著升高(P＜0.05)。胸肌組織中ANT mRNA的表達(dá)水平在試驗各組間無顯著性差異(P＞0.05);應(yīng)激組Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ及恢復(fù)組Ⅵ相對于對照組腿肌組織中ANT mRNA水平顯著升高(P＜0.05)。

8、　　 4.應(yīng)激試驗步驟同試驗2，通過對血液和組織樣品進(jìn)行分析結(jié)果顯示:與對照組Ⅷ相比應(yīng)激組Ⅴ和恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ血清中膽堿酯酶的活性顯著下降(P＜0.05)。與對照組Ⅷ相比應(yīng)激組中Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ肌酸激酶的活性顯著升高(P＜0.05)，恢復(fù)組Ⅶ中肌酸激酶活性相對于其他組升高顯著(P＜0.05)。冷應(yīng)激過程和恢復(fù)過程對乳酸脫氫酶和γ-谷氨酸轉(zhuǎn)肽酶活性影響不明顯(P＞0.05)。
　　 低溫環(huán)境下，相對于對照組Ⅷ和恢復(fù)組Ⅶ應(yīng)激組Ⅱ肝臟GSH-

9、PX水平顯著升高(P＜0.05)。應(yīng)激組Ⅴ、Ⅵ組肝臟中T-SOD酶活性相對于對照組Ⅷ和應(yīng)激組Ⅰ組顯著升高(P＜0.05)。應(yīng)激過程和恢復(fù)過程肝臟組織中T-AOC、MDA水平變化不顯著(P＞0.05)。
　　 與對照組Ⅷ相比，恢復(fù)組Ⅵ腎臟中T-AOC顯著升高(P＜0.05)，而應(yīng)激組間T-AOC變化不明顯(P＞0.05)。與對照組相Ⅷ應(yīng)激組Ⅰ恢復(fù)組Ⅶ相比，恢復(fù)組ⅥT-SOD活性升高顯著升高(P＜0.05)。樣品中GSH-PX活性以

10、及MDA含量變化不顯著(P＞0.05)。
　　 應(yīng)激組Ⅳ胰腺T-AOC水平相對于應(yīng)激組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ以及恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ顯著升高(P＜0.05)，恢復(fù)組Ⅵ相對于應(yīng)激組Ⅳ、Ⅴ顯著降低(P＜0.05)。應(yīng)激組Ⅱ、Ⅲ以及恢復(fù)組胰臟中GSH-PX相對于應(yīng)激組Ⅰ顯著下降(P＜0.05)。相對于對照組Ⅷ以及應(yīng)激組Ⅲ應(yīng)激組Ⅰ MDA含量較高，且差異顯著(P＜0.05)。在試驗過程中胰臟中T-SOD活性變化不顯著(P＞0.05)。
　　 相對于

11、對照組Ⅷ，骨骼肌中應(yīng)激組Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ中T-AOC顯著升高(P＜0.05)。應(yīng)激組Ⅳ、Ⅴ以及恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ中GSH-PX含量相對于應(yīng)激組Ⅱ降低，且差異顯著(P＜0.05)。應(yīng)激組ⅡGSH-PX活性相對于對照組Ⅷ升高(P＜0.05)。應(yīng)激組Ⅳ相對于應(yīng)激組Ⅰ肌肉組織中T-SOD活性顯著升高(P＜0.05);與應(yīng)激組Ⅳ相比，應(yīng)激組Ⅴ以及恢復(fù)組Ⅵ、Ⅶ總T-SOD活性顯著降低(P＜0.05);與對照組Ⅷ相比恢復(fù)組ⅦT-SOD活性顯著降低。相對于對照組Ⅷ