大蒜素改善禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒感染SPF雞免疫功能的機(jī)制.pdf

1、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（REV）為禽C型逆轉(zhuǎn)錄病毒，感染后主要引發(fā)禽類(lèi)生長(zhǎng)抑制、急性網(wǎng)狀細(xì)胞腫瘤、淋巴以及其他組織的慢性腫瘤。在該病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，免疫抑制起到了至關(guān)重要的作用，但是其潛在的分子機(jī)制尚不清楚。本研究以REV SNV-C5株人工接種SPF雞，初步探討了免疫抑制過(guò)程中可能發(fā)揮作用的細(xì)胞因子及相關(guān)信號(hào)通路。
　　大蒜素是大蒜的主要有效成分，對(duì)多種病毒和致病菌均有良好的抵抗能力。針對(duì)REV感染，目前尚缺乏安全有效的疫

2、苗及特效藥物進(jìn)行防制。本研究采用添加不同濃度大蒜素的日糧飼喂REV感染的SPF雞，探討大蒜素對(duì)REV感染雞的免疫調(diào)節(jié)作用，以期為合理有效的防控REV提供新的思路。
　　研究一大蒜素緩解REV感染引起的SPF雞生長(zhǎng)抑制及免疫抑制
　　試驗(yàn)采用100TCID50 REV攻毒處理7d SPF雛雞后飼喂添加有不同濃度大蒜素（0、300mg/kg、600mg/kg）的日糧，并設(shè)置大蒜素單獨(dú)處理組（0、150mg/kg、300mg/kg

3、）。于感染后2W、3W、4W、5W采集胸腺、脾臟和法氏囊樣品。研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，REV感染后2W始顯著抑制了SPF雞的生長(zhǎng)發(fā)育（P＜0.0001），胸腺（P＜0.05）、法氏囊指數(shù)（P＜0.05）顯著降低，脾臟指數(shù)顯著升高（P＜0.05），脾臟淋巴細(xì)胞活性降低（P＜0.05）。添加300mg/kg大蒜素日糧有效緩解了REV感染引起的生長(zhǎng)抑制（P＜0.0001）及免疫器官異常發(fā)育（P＜0.05），提高脾臟淋巴細(xì)胞活性（P＜0.0

4、001）。單獨(dú)飼喂大蒜素對(duì)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)顯著影響（P＞0.05）。上述結(jié)果表明REV感染引起了機(jī)體的免疫抑制，大蒜素有效緩解REV感染誘導(dǎo)的免疫抑制。
　　研究二大蒜素緩解REV引起SPF雞的炎性反應(yīng)
　　應(yīng)用研究一中模型，檢測(cè)大蒜素及REV處理對(duì)試驗(yàn)雞內(nèi)源性免疫相關(guān)炎性因子表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，REV感染后顯著提高促炎性因子IL-1（P＜0.01）、TNF-α（P＜0.01）、IFN-γ（P＜0.01），抗炎因子IL-4(

5、P＜0.01)、IL-10（P＜0.05）的含量及其轉(zhuǎn)錄水平。REV感染雞脾臟中MDA5（P＜0.05）、TLR3（P＜0.05）、TLR4（P＜0.01）、TLR7（P＜0.05）及其接頭分子MyD88（P＜0.05）表達(dá)水平顯著升高。炎性信號(hào)通路MAPK包括p38（P＜0.05）、ERK（P＜0.05）、JNK（P＜0.05）磷酸化水平顯著升高，NF-κB移位入核（P＜0.01）顯著增加。此外，STAT6信號(hào)通路在REV感染過(guò)程中轉(zhuǎn)

6、錄水平顯著升高（P＜0.01），促進(jìn)下游ISG12-1（P＜0.05）、IRF（P＜0.01）轉(zhuǎn)錄表達(dá)。大蒜素有效抑制了炎性因子以及TLRs等受體的異常變化變化，降低MAPK、NF-κB的磷酸化水平。此外，研究發(fā)現(xiàn)，ERK抑制劑能夠抑制REV基因復(fù)制（P＜0.0001）。上述結(jié)果表明，REV侵入機(jī)體后可能與TLRs及MDA5等模式識(shí)別受體結(jié)合，激發(fā)炎性反應(yīng)，引發(fā)機(jī)體內(nèi)源性免疫應(yīng)答，而大蒜素抑制了REV的復(fù)制，緩解感染引起的炎癥反應(yīng)，揭示

7、大蒜素對(duì)REV感染有一定的緩解作用。
　　研究三大蒜素減輕REV感染導(dǎo)致SPF雞氧化損傷
　　應(yīng)用研究一中模型，檢測(cè)大蒜素及REV處理對(duì)試驗(yàn)雞抗氧化系統(tǒng)的影響。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，REV感染后血清中CAT（P=0.1024）、SOD（P＜0.05）、GPx（P＜0.05）活性顯著降低，GSH含量降低（P＜0.05），MDA（P＜0.05）和蛋白質(zhì)羰基（P＜0.01）含量顯著升高。REV長(zhǎng)期感染導(dǎo)致胸腺中抗氧化酶活性降低，

8、氧化應(yīng)激產(chǎn)物含量升高，胸腺（P＜0.05）、脾臟（P＜0.05）中Nrf2磷酸化水平升高，表明REV感染導(dǎo)致機(jī)體一定程度的氧化損傷，破壞機(jī)體的抗氧化-氧化平衡。REV感染后飼喂大蒜素有效提高抗氧化酶活性，減少Nrf2入核，提高機(jī)體抗氧化能力。
　　研究四大蒜素及REV感染對(duì)脂肪細(xì)胞的影響
　　研究一發(fā)現(xiàn)REV感染顯著降低了機(jī)體腹脂沉積量（P＜0.05）。本試驗(yàn)初步探討了REV感染對(duì)脂肪細(xì)胞的影響以及大蒜素的作用。試驗(yàn)應(yīng)用15

9、胚齡的SPF雞胚建立體外脂肪細(xì)胞培養(yǎng)模型，分別用0 TCID50、5 TCID50、10 TCID50、20 TCID50、40 TCID50 REV處理誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞0h、12h、24h、48h、72h，發(fā)現(xiàn)20 TCID50、40 TCID50 REV感染脂肪細(xì)胞1h后顯著促進(jìn)脂肪細(xì)胞因子TNF-α的表達(dá)（P＜0.01），磷酸化p38（P＜0.01）、ERK（P＜0.0001）、JNK（P＜0.0001）以及NF-κB（P＜

10、0.0001），表明REV感染引起了脂肪細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)。REV感染脂肪細(xì)胞后激活了AMPK（P＜0.0001）信號(hào)途徑，促進(jìn)了脂肪細(xì)胞內(nèi)能量代謝，抑制了細(xì)胞內(nèi)TG（P＜0.1）的合成以及PPARγ（P＜0.0001）的轉(zhuǎn)錄。分別采用5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL大蒜素處理REV感染的脂肪細(xì)胞24h、48h、72h后發(fā)現(xiàn)，25μg/mL、50μg/mL大蒜素處理24h后顯著抑制了TNF-α的轉(zhuǎn)錄（P＜0.01