團(tuán)頭魴三倍體和雌核發(fā)育的誘導(dǎo)及其主要生物學(xué)特性的研究.pdf

1、團(tuán)頭魴(Megalobrama amblycephala)又稱武昌魚，屬鯉形目(Cypdniformes)，鯉科（Cyprinidae），魴屬(Megalobrama)，是我國特有的淡水經(jīng)濟(jì)魚類。由于它養(yǎng)殖成本低、生長快、成活率高等優(yōu)點(diǎn)，早在20世紀(jì)60年代就已成為我國主要的淡水養(yǎng)殖品種之一。本研究是利用冷休克對(duì)團(tuán)頭魴進(jìn)行了三倍體及雌核發(fā)育的誘導(dǎo)，期望篩選出誘導(dǎo)三倍體和雌核發(fā)育的最佳條件;并同時(shí)對(duì)團(tuán)頭魴雌核發(fā)育個(gè)體的主要形態(tài)特征及遺傳特

2、征進(jìn)行分析;用微衛(wèi)星DNA分子標(biāo)記的方法對(duì)誘導(dǎo)團(tuán)頭魴雌核發(fā)育個(gè)體的遺傳物質(zhì)來源進(jìn)行檢測(cè)，以及對(duì)團(tuán)頭魴雌核發(fā)育群體的純合度及遺傳多樣性進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 1團(tuán)頭魴三倍體的誘導(dǎo)及鑒定
　　 采用冷休克抑制第二極體釋放的方法誘導(dǎo)團(tuán)頭魴三倍體，篩選出有效的處理溫度、起始時(shí)間和持續(xù)時(shí)間，比較團(tuán)頭魴三倍體倍性的鑒定方法，并對(duì)團(tuán)頭魴二倍體與三倍體早期生長進(jìn)行比較。結(jié)果表明在孵化水溫26～27℃，起始時(shí)間為受精后3min

3、，0～2℃持續(xù)處理25 min的效果最佳，孵化率和三倍體誘導(dǎo)率分別達(dá)到了34.31％和60.67％。處理溫度、起始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間都會(huì)對(duì)三倍體的誘導(dǎo)率產(chǎn)生不同影響。采用染色體計(jì)數(shù)、DNA含量測(cè)定和紅細(xì)胞大小測(cè)定法分別對(duì)三倍體個(gè)體進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示，三倍體的染色體3n=72，對(duì)照組二倍體2n=48;流式細(xì)胞儀測(cè)定的三倍體與二倍體DNA含量差異極顯著(p＜0.01），其比值為1.49∶1;三倍體與二倍體的紅細(xì)胞及核大小的各項(xiàng)數(shù)據(jù)之間均存在差

4、異顯著性，尤其是核體積和紅細(xì)胞體積存在著極顯著差異(P＜0.01)，三倍體紅細(xì)胞和核體積分別為二倍體的1.40倍和1.51倍。染色體計(jì)數(shù)、DNA含量測(cè)定和紅細(xì)胞（核）的大小測(cè)量方法都可以準(zhǔn)確鑒定團(tuán)頭魴三倍體個(gè)體;在生長的早期團(tuán)頭魴二倍體的生長速度要快于三倍體。
　　 2雌核發(fā)育的誘導(dǎo)及主要生物學(xué)特性的研究
　　 采用松浦鏡鯉(Cyprinus carpio Songpu carp)遺傳滅活的精子刺激團(tuán)頭魴卵子，冷休克抑制

5、卵子第二極體的釋放獲得團(tuán)頭魴雌核發(fā)育個(gè)體。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)雌核發(fā)育個(gè)體，其DNA含量與正常團(tuán)頭魴二倍體的DNA含量并沒有差異顯著性(P＞0.05），表明雌核發(fā)育個(gè)體為二倍體。對(duì)雌核發(fā)育群體的生長、形態(tài)特征、性腺發(fā)育、紅細(xì)胞大小、染色體組型進(jìn)行分析。結(jié)果表明:雌核發(fā)育個(gè)體早期的生長優(yōu)勢(shì)明顯小于正常個(gè)體;對(duì)雌核發(fā)育群體與正常群體通過可數(shù)、可量性狀分析比較，兩個(gè)群體沒有顯著性差異(P＞0.05)，雌核發(fā)育群體出現(xiàn)了畸形個(gè)體，尾鰭條數(shù)為12，

6、而正常個(gè)體為18～20，雌核發(fā)育與正常個(gè)體的差異顯著性(P＜0.05);觀察20尾雌核發(fā)育個(gè)體的性腺發(fā)育情況，所有個(gè)體都為雌性且性腺發(fā)育良好，沒有出現(xiàn)性腺萎縮的個(gè)體;通過對(duì)紅細(xì)胞各個(gè)數(shù)據(jù)的測(cè)量，雌核發(fā)育群體與正常群體的沒有顯著性差異（P＞0.05）;通過對(duì)染色體條數(shù)及組性的分析，兩個(gè)群體的染色體條數(shù)都是48，核型都為18m+26sm+4st。
　　 3團(tuán)頭魴雌核發(fā)育群體的微衛(wèi)星標(biāo)記分析
　　 通過引物優(yōu)化，篩選父母本具有

7、特異性的8對(duì)微衛(wèi)星引物，對(duì)雌核發(fā)育個(gè)體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明雌核發(fā)育個(gè)體的遺傳物質(zhì)均來自母本，沒有父本的遺傳物質(zhì)滲入。篩選出母本為雜合的10對(duì)微衛(wèi)星引物對(duì)子代的純合性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示雌核發(fā)育后代在TTF-EST46、TTF-EST61、TTF-EST851全部為純合，而TTF-EST12座位上的重組率為86.4％，其他6個(gè)位點(diǎn)的重組率為100％，這10個(gè)位點(diǎn)的平均重組率為68.64％。并利用這10對(duì)微衛(wèi)星引物對(duì)團(tuán)頭魴對(duì)照組和雌核發(fā)育群體的