銅和鎘對(duì)唐魚肝臟CYP1A和CYP3A的影響.pdf

1、本文以唐魚（Tanichthys albonubes）為試驗(yàn)材料，通過對(duì)唐魚CYP1A和CYP3A的酶活性測(cè)定、mRNA表達(dá)測(cè)定和蛋白表達(dá)測(cè)定，于酶活、基因轉(zhuǎn)錄和翻譯三個(gè)水平研究了重金屬銅和鎘對(duì)唐魚兩種細(xì)胞色素P450酶的影響，初步探討了銅和鎘污染與這些指標(biāo)之間的變化關(guān)系。主要結(jié)果如下:
　　 1銅和鎘對(duì)唐魚肝臟CYP1A、CYP3A酶活性的影響
　　 測(cè)定了不同濃度的銅、鎘單一暴露和銅—鎘聯(lián)合暴露對(duì)唐魚肝臟CYP1A和

2、CYP3A酶活性的影響。銅、鎘對(duì)唐魚肝臟CYP1A酶活性影響結(jié)果表明，低劑量組銅暴露下CYP1A酶活性于72 h顯著上升(p＜0.05)，96 h繼續(xù)上升并與對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)，高劑量組CYP1A酶活性于48 h顯著上升(p＜0.05)并繼續(xù)增加，72h和96h與對(duì)照組均有顯著性差異(p＜0.05);低劑量組鎘暴露下CYP1A酶活性各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組均無顯著性差異(p＞0.05)，高劑量組CYP1A酶活性24h和48h與對(duì)

3、照組相比無顯著性差異，72h和96h顯著性增加(p＜0.05);銅—鎘聯(lián)合毒性對(duì)唐魚肝臟CYP1A酶活性作用24 h、48 h和72 h表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)，96 h體現(xiàn)為拮抗效應(yīng)。銅鎘對(duì)唐魚肝臟CYP3A酶活性影響結(jié)果表明，低劑量組銅暴露下CYP3A酶活性72 h顯著上升(p＜0.05)，96 h繼續(xù)上升并與對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)，高劑量組CYP3A酶活性48h顯著性上升(p＜0.05)，72 h略有下降，96 h又繼續(xù)上升，與

4、對(duì)照組差異顯著(p＜0.05);低劑量組和高劑量組鎘暴露下CYP3A酶活性均為24 h、48 h和72 h與對(duì)照組無顯著性差異，96 h CYP3A酶活性顯著增加(p＜0.05);銅—鎘聯(lián)合毒性對(duì)唐魚肝臟CYP3A酶活性48 h和72 h表現(xiàn)為協(xié)同作用，96 h近似于獨(dú)立作用。
　　 2銅和鎘對(duì)唐魚肝臟CYP1A、CYP3AmRNA表達(dá)量的影響
　　 利用同源克隆獲得了431 bp的唐魚CYP3A基因cDNA片段(Gen

5、bank登錄號(hào):KC844034)，利用熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定了不同濃度的銅鎘單一暴露和銅—鎘聯(lián)合暴露對(duì)唐魚肝臟CYP1A和CYP3A mRNA表達(dá)量的影響。銅鎘對(duì)唐魚肝臟CYP3AmRNA表達(dá)量的影響結(jié)果表明，低劑量組銅暴露下CYP3A mRNA表達(dá)水平在48 h顯著上調(diào)(p＜0.05)，72h下降后96h繼續(xù)顯著上調(diào)(p＜0.05)，高劑量組CYP3A mRNA表達(dá)水平整體在48 h顯著上調(diào)(p＜0.05);低劑量組鎘暴露下CYP3

6、A mRNA表達(dá)水平在48 h表現(xiàn)為顯著上調(diào)并達(dá)到峰值(p＜0.05)，隨后呈下降趨勢(shì)，96 h又達(dá)到顯著上調(diào)水平(p＜0.05)，高劑量組CYP3A mRNA表達(dá)水平在24 h和48 h與對(duì)照組均無顯著差異(p＞0.05)，72 h達(dá)到顯著上調(diào)水平(p＜0.05)，96 h有所下降，但仍與對(duì)照組差異顯著(p＜0.05);聯(lián)合處理的各劑量組CYP3A基因mRNA表達(dá)水平相較于銅、鎘單一暴露表現(xiàn)出一定的協(xié)同作用。銅、鎘對(duì)唐魚肝臟CYP1A

7、 mRNA表達(dá)量的影響結(jié)果表明，低劑量組銅暴露下CYP1AmRNA表達(dá)量在48h和96 h誘導(dǎo)作用顯著(p＜0.05);高劑量組72 h CYP1A基因表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(p＜0.05);低劑量組鎘暴露下CYP1A mRNA表達(dá)量48 h顯著性增強(qiáng)(p＜0.05)，隨后誘導(dǎo)作用逐漸下降;高劑量組CYP1A基因表達(dá)水平在48 h和72 h顯著性降低(p＜0.05)，CYP1A基因表達(dá)受到抑制，96 h抑制作用逐漸消失;銅—鎘聯(lián)合處理2

8、4 h兩種重金屬離子表現(xiàn)為拮抗作用，48 h聯(lián)合毒性與單一毒性作用無明顯差異，72 h和96 h表現(xiàn)為協(xié)同作用。
　　 3銅和鎘對(duì)唐魚肝臟CYP1A蛋白表達(dá)量的影響
　　 利用蛋白免疫印跡雜交技術(shù)測(cè)定不同濃度的銅鎘單一暴露和銅—鎘聯(lián)合暴露對(duì)唐魚肝臟CYP1A蛋白表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，低劑量組銅暴露下CYP1A蛋白表達(dá)量48 h顯著上升(p＜0.05)，72 h繼續(xù)上升并達(dá)到峰值，約為對(duì)照組的4.8倍(p＜0.05），9

9、6h與對(duì)照組無顯著性差異，高劑量組CYP1A蛋白表達(dá)水平24 h與對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)，誘導(dǎo)作用隨時(shí)間的增加逐漸降低，48 h和72 h蛋白相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組均無顯著性差異，96 h蛋白表達(dá)量又顯著增加(p＜0.05);低劑量組鎘暴露下CYP1A蛋白表達(dá)水平24 h顯著增加(p＜0.05)，48 h略微下降，72 h和96 h CYP1A蛋白表達(dá)量與對(duì)照組無顯著性差異;高劑量組CYP1A蛋白表達(dá)量24 h與對(duì)照組有顯著性差

10、異(p＜0.05)，隨后持續(xù)下降，48 h、72 h和96 h蛋白相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組均無顯著性差異;聯(lián)合處理低濃度組CYP1A蛋白表達(dá)量各時(shí)間段與對(duì)照組相比都有顯著性差異(p＜0.05)，隨時(shí)間的增加呈先降后升的趨勢(shì);聯(lián)合處理高濃度組CYP1A蛋白表達(dá)水平24 h與對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)，48 h與對(duì)照組無顯著性差異，72 h顯著高于對(duì)照組（p＜0.05），96 h與對(duì)照組無顯著性差異。
　　 通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，唐魚CY