佐米曲坦對(duì)大鼠肝臟CYP3A誘導(dǎo)作用的研究.pdf

1、細(xì)胞色素P450(cytochrome P450,CYP)是最大的藥物代謝酶蛋白超家族之一,主要存在于肝臟中。P450酶的其中一個(gè)重要特點(diǎn)是易受各種藥物和不同結(jié)構(gòu)化合物的誘導(dǎo)。而在臨床聯(lián)合用藥時(shí),可能發(fā)生與P450酶誘導(dǎo)相關(guān)的藥物相互作用。P450酶的誘導(dǎo)作用能引起藥物肝臟或小腸清除率的改變,進(jìn)而影響血藥濃度。因此,誘導(dǎo)作用能引起個(gè)體與個(gè)體之間或個(gè)體本身對(duì)藥物代謝的差異,引起藥物相互作用。聯(lián)合用藥會(huì)引起藥物失效或產(chǎn)生藥物副作用。CYP3

2、A酶在體內(nèi)含量最高,在肝臟和小腸中都有分布,其底物相當(dāng)廣泛,臨床一半以上藥物由其參與代謝,CYP3A在藥物相互作用中有很重要的作用。佐米曲坦作為治療偏頭痛的藥物,臨床上很有可能與其它很多藥物聯(lián)合使用,而且也有研究證明它能與很多藥物產(chǎn)生相互作用。因此,本文研究佐米曲坦對(duì)肝臟CYP3A的誘導(dǎo)作用,能對(duì)臨床安全合理用藥提供一些科學(xué)依據(jù)。本文分以下兩部分進(jìn)行。
　　第一部分佐米曲坦CYP3A誘導(dǎo)作用的體內(nèi)研究
　　佐米曲坦誘導(dǎo)大鼠以

3、后,從幾個(gè)方面來(lái)研究佐米曲坦對(duì)大鼠肝中CYP3A酶的誘導(dǎo)作用。首先,我們采用睪酮和硝苯地平為CYP3A酶的探針底物,體外孵育法作為代謝研究方法,測(cè)定佐米曲坦誘導(dǎo)后大鼠肝微粒體中CYP3A的活性變化。同時(shí),留取一部分誘導(dǎo)過(guò)的大鼠肝組織采用RT-PCR法測(cè)定CYP3A1和CYP3A2 mRNA表達(dá)的變化情況。最后,選用咪達(dá)唑侖作為CYP3A的體內(nèi)探針,大鼠用佐米曲坦誘導(dǎo)后,尾靜脈注射咪達(dá)唑侖,測(cè)定血漿中藥物的濃度,分析藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果我

4、們發(fā)現(xiàn),經(jīng)佐米曲坦誘導(dǎo)的雄性大鼠肝微粒體與經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體相似,對(duì)睪酮和硝苯地平都表現(xiàn)出了很強(qiáng)的代謝活性,與空白對(duì)照組比有明顯差異。而佐米曲坦誘導(dǎo)的雌性大鼠的肝微粒體對(duì)翠酮和硝苯地平的代謝活性與空白對(duì)照組比沒(méi)有明顯變化。同時(shí)在RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)經(jīng)佐米曲坦誘導(dǎo)的雄性大鼠肝中CYP3A1和CYP3A2 mRNA水平都明顯提高，而雌性大鼠肝中CYP3A1和CYP3A2 mRNA水平都沒(méi)有提高。最后，在咪達(dá)哇侖的藥物動(dòng)力

5、學(xué)研究中，我們發(fā)現(xiàn)雄性大鼠中，佐米曲坦誘導(dǎo)組的AUC和t1/2與空白組比顯著降低，而清除率明顯增加，同樣地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組的變化與佐米曲坦誘導(dǎo)組相似;而雌性大鼠組中，地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組的AUC和t1/2二與空白組比顯著降低，清除率明顯增加，但是佐米曲坦誘導(dǎo)組沒(méi)有出現(xiàn)相似變化，與空白比沒(méi)有顯著變化。這個(gè)結(jié)果與前面微粒體代謝和RT-PCR法檢測(cè)的結(jié)果相符合。
　　第二部分佐米曲坦CYP3A誘導(dǎo)作用的體外研究
　　第一部分中佐米曲

6、坦對(duì)大鼠的誘導(dǎo)是在體內(nèi)，為了排除體內(nèi)各種激素調(diào)節(jié)的影響，我們?cè)隗w外對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)并研究CYP3A酶的變化。原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞是通用的毒理學(xué)和藥理學(xué)體外研究模型，而且也經(jīng)常用作體外CYP酶誘導(dǎo)作用的研究工具。因此，我們用原代培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞來(lái)研究佐米曲坦體外誘導(dǎo)CYP3A的作用。采用兩步灌流法新鮮分離大鼠肝細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)，用佐米曲坦進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)24h，然后采用CYP3A的探針?biāo)幬锎渫獧z測(cè)CYP3A的活性變化。另外，以RT-PCR法檢測(cè)肝細(xì)

7、胞中CYP3A1/3A2mRNA表達(dá)的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在大鼠肝細(xì)胞離體培養(yǎng)后，經(jīng)佐米曲坦誘導(dǎo)，雄性和雌性大鼠的肝細(xì)胞對(duì)翠酮的代謝活性沒(méi)有明顯差異，而且與空白未誘導(dǎo)的細(xì)胞比，代謝攀酮的活性沒(méi)有增加;而陽(yáng)性地塞米松對(duì)照組無(wú)論雌雄來(lái)源的細(xì)胞，CYP3A活性都有明顯增強(qiáng)。同樣，RT-PCR檢測(cè)中也表現(xiàn)出一致的結(jié)論，佐米曲坦處理后的無(wú)論雌性還是雄性大鼠肝細(xì)胞CYP3A1和CYP3A2 mRNA水平都沒(méi)有增加。
　　從兩部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們得