水稻瘤矮病毒侵染介體昆蟲細(xì)胞誘導(dǎo)形成病毒原質(zhì)的機制.pdf

1、水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus, RGDV）是呼腸孤病毒科（Reoviridae）植物呼腸孤病毒屬（Phytoreovirus）的一個成員，在寄主植物和介體昆蟲細(xì)胞內(nèi)都能進(jìn)行有效的增殖，由介體電光葉蟬和黑尾葉蟬以持久增殖型方式傳播。其基因組編碼6個結(jié)構(gòu)蛋白（P1、P2、P3、P5、P6和P8）和6個非結(jié)構(gòu)蛋白（Pns4、Pns7、Pns9、Pns10、Pns11和Pns12）。本文利用草地貪夜蛾細(xì)胞（Spodo

2、ptera frugiperda, Sf9）和電光葉蟬培養(yǎng)細(xì)胞體系，對非結(jié)構(gòu)蛋白Pns7、Pns9、Pns12及結(jié)構(gòu)蛋白P8進(jìn)行了功能研究。
　　為了明確RGDV的病毒原質(zhì)形成機制，本研究通過異源表達(dá)體系分析Pns7、Pns9和Pns12在Sf9細(xì)胞內(nèi)的定位情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Pns7和Pns9定位在細(xì)胞質(zhì)中，而Pns12定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)。將三個非結(jié)構(gòu)蛋白分別進(jìn)行兩兩共定位，發(fā)現(xiàn)Pns7和Pns9能夠共定位在細(xì)胞質(zhì)中，而Pns7和

3、Pns12未出現(xiàn)共同定位在細(xì)胞內(nèi)的情況，仍與單獨表達(dá)的情況相似；當(dāng)Pns9和Pns12共表達(dá)時，發(fā)現(xiàn)Pns9可以招募定位于細(xì)胞核的Pns12到細(xì)胞質(zhì)，從而共定位在一起。表明Pns7和Pns12、Pns9和Pns12可能存在相互作用的關(guān)系。利用體外合成的dsRNA誘導(dǎo)的RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術(shù)在介體昆蟲電光葉蟬培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)，分別干擾RGDV Pns7、Pns9和Pns12的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者的表達(dá)都受到了

4、明顯的抑制，在細(xì)胞內(nèi)病毒原質(zhì)形成數(shù)量大幅度減少。因此表明RGDV Pns7、Pns9和Pns12蛋白都是病毒原質(zhì)基質(zhì)的組成成分，三者之間存在互作關(guān)系，缺少其中任意一個蛋白都將影響病毒原質(zhì)的形成和病毒的復(fù)制。
　　已知結(jié)構(gòu)蛋白P8是病毒外層衣殼的主要成分，但其在病毒侵染介體培養(yǎng)細(xì)胞過程中的功能尚未弄清。為此，本研究利用RNAi技術(shù)體系研究RGDV P8蛋白在病毒侵染電光葉蟬培養(yǎng)細(xì)胞中的功能。通過對dsP8處理后的電光葉蟬培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行