黃斑藍(lán)子魚急性淺水應(yīng)激反應(yīng)的特點(diǎn)與?；撬岬目箲?yīng)激作用研究.pdf

1、魚類應(yīng)激時(shí),主要啟動(dòng)兩種生理反應(yīng)系統(tǒng),即“交感-嗜鉻組織”系統(tǒng)和“下丘腦-垂體-腎間組織軸(HPI軸)”系統(tǒng)。前者通過(guò)交感神經(jīng)作用于嗜鉻組織,使其分泌腎上腺素;后者通過(guò)下丘腦分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)作用于腦垂體,使其分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH),進(jìn)而刺激腎間組織釋放皮質(zhì)醇。腎上腺素和皮質(zhì)醇使血糖濃度升高,以滿足機(jī)體在應(yīng)激時(shí)的能量需要;同時(shí),魚體細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生熱休克蛋白(HSP)來(lái)增強(qiáng)對(duì)自身的保護(hù)作用。
　　黃斑藍(lán)子

2、魚(Siganus canaliculatus)是我國(guó)東南沿海重要的植食性海水養(yǎng)殖魚類。該魚受到刺激后,應(yīng)激反應(yīng)較強(qiáng)烈,容易造成魚體受傷甚至死亡,給養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來(lái)較大損失。為了弄清黃斑藍(lán)子魚應(yīng)激反應(yīng)的特點(diǎn),開發(fā)降低應(yīng)激反應(yīng)的方法,本研究選取急性淺水應(yīng)激作為實(shí)驗(yàn)應(yīng)激處理方式,主要通過(guò)測(cè)定血清的腎上腺素、皮質(zhì)醇、膽固醇和葡萄糖等生理生化指標(biāo)的濃度以及腦中CRH和HSP70的mRNA水平的變化情況,探討該魚急性應(yīng)激反應(yīng)的特點(diǎn)；同時(shí),通過(guò)魚體浸泡

3、試驗(yàn)評(píng)估?；撬岬目箲?yīng)激作用。得到的主要結(jié)果與結(jié)論如下：
　　(1) 對(duì)黃斑藍(lán)子魚給予4 min淺水應(yīng)激后,其血清腎上腺素水平立即顯著升高(P<0.05),從應(yīng)激前的2.00±0.22 ng/ml達(dá)到應(yīng)激后的15.12±1.04 ng/ml,之后逐漸恢復(fù)到應(yīng)激前水平。葡萄糖濃度在應(yīng)激后20 min達(dá)到最大值7.10±0.38 mmol/L,是應(yīng)激前(2.15±0.02 mmol/L)的約3.5倍(P<0.05)。應(yīng)激后60 min時(shí)

4、,腦中HSP70 mRNA的表達(dá)量達(dá)到最大值,為應(yīng)激前的11.54倍(P<0.05)。血清皮質(zhì)醇、膽固醇濃度沒有顯著變化(P>0.05)。結(jié)果說(shuō)明,“交感-嗜鉻組織”系統(tǒng)可能是黃斑藍(lán)子魚的急性應(yīng)激途徑之一,魚體通過(guò)釋放腎上腺素來(lái)提高血糖濃度以滿足應(yīng)激時(shí)的能量需要,同時(shí)通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞HSP70的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)魚體的保護(hù)作用。這提示,血清腎上腺素和葡萄糖濃度以及腦HSP70 mRNA水平可作為反映黃斑藍(lán)子魚急性應(yīng)激狀況的指標(biāo)。
　　(2)

5、采用RT-PCR和RACE-PCR的方法克隆得到黃斑藍(lán)子魚的CRH基因(GenBank登錄號(hào)為KF039716), CRH前體 cDNA序列的全長(zhǎng)為1025bp,其中5’端非編碼區(qū)有123bp, 3’端非編碼區(qū)為389bp；編碼區(qū)為513bp,共編碼170個(gè)氨基酸。跟其他物種一樣,黃斑藍(lán)子魚CRH前體氨基酸序列也由一個(gè)推測(cè)的信號(hào)肽、一個(gè)功能未知保守區(qū)和CRH成熟肽組成。信號(hào)肽為N端的前24個(gè)氨基酸,裂解位點(diǎn)位于第24和第25位氨基酸殘基

6、之間；成熟肽位于一個(gè)潛在的蛋白水解信號(hào)(精氨酸-精氨酸)和一個(gè)C末端酰胺化信號(hào)(甘氨酸-賴氨酸)之間,其氨基酸序列與其他魚類具有78％-100%的相似性。應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚血清皮質(zhì)醇濃度和腦中CRH mRNA水平?jīng)]有顯著變化(P>0.05),說(shuō)明黃斑藍(lán)子魚急性淺水應(yīng)激時(shí)可能沒有啟動(dòng)HPI軸。
　　(3)使用20ppm?；撬峤菟{(lán)子魚2d,可顯著降低其急性淺水應(yīng)激后的血清腎上腺素和葡萄糖水平以及腦HSP70mRNA表達(dá)量,說(shuō)明牛磺酸具