檢驗(yàn)乙肝兩對(duì)半質(zhì)量的比較分析——畢業(yè)論文

1、<p><b>　　河南焦作職工醫(yī)學(xué)院</b></p><p><b>　　畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）</b></p><p>　　題目： 檢驗(yàn)乙肝兩對(duì)半質(zhì)量的比較分析 </p><p>　　姓 名： </p><p>　　學(xué) 號(hào)：

2、 </p><p>　　專(zhuān) 業(yè)： 臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn) </p><p>　　年 級(jí)： </p><p>　　層 次： </p><p>　　完成日期： </p&g

3、t;<p>　　指導(dǎo)教師： </p><p>　　檢驗(yàn)乙肝兩對(duì)半質(zhì)量的比較分析</p><p>　　【摘要】 目的: 探討與分析臨床檢驗(yàn)乙肝兩對(duì)半的檢驗(yàn)質(zhì)量影響因素性。 方法： 整理本醫(yī)院在實(shí)際研究當(dāng)中對(duì)乙肝兩對(duì)半的檢驗(yàn)質(zhì)量影響因素的各種因素，同時(shí)對(duì)其實(shí)施相應(yīng)綜合措施進(jìn)行探討。 結(jié)果: 根據(jù)討論中所得的原因?qū)ζ溥M(jìn)行有效的控制，避免

4、出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果,保證檢驗(yàn)質(zhì)量,為臨床提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。 結(jié)論: 全面、細(xì)致以及周到的具有綜合性的措施能夠在最大程度上使對(duì)標(biāo)本質(zhì)量產(chǎn)生的影響有所減少，對(duì)影響因素進(jìn)行有效的控制，使檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量得到了一定程度上的提高 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎；血清標(biāo)志物；檢驗(yàn)質(zhì)量 </p><p>　　酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linked immunosorbent

5、assay,ELISA)廣泛用于乙肝兩對(duì)半檢測(cè)。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,有時(shí)可見(jiàn)到一些假陽(yáng)性或假陰性,本文就ELISA測(cè)定乙肝兩對(duì)半的影響因素做討論。對(duì)ELISA與時(shí)間分辨熒光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)檢測(cè)方法進(jìn)行比較,就包括試劑、標(biāo)本、操作、干擾因素的影響進(jìn)行分析。乙肝兩對(duì)半的檢驗(yàn)質(zhì)量影響因素還包括使用儀器設(shè)備的功能以及檢修、藥物的影響等,一般檢測(cè)時(shí)應(yīng)從多方面排除干擾

6、因素,避免出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果,保證檢驗(yàn)質(zhì)量,為臨床提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。 </p><p>　　1乙肝兩對(duì)半定性與定量方法 </p><p>　　1.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） </p><p>　　酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)是為乙肝患者進(jìn)行臨床檢測(cè)時(shí)常用的方法，因本身方法學(xué)的局限性，易造成HBV漏診。ELISA是一種酶標(biāo)記固相免疫測(cè)定技術(shù)。其基

7、本原理是把抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；并將抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)記抗原或抗體，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性；測(cè)定是將受檢樣品（含待測(cè)抗原或抗體）和酶標(biāo)記抗原和抗體按一定程度與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物；用洗滌的方法將固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例；加入底物，底物被固相載體上的酶催化變成有色產(chǎn)物，通過(guò)定性或定

8、量檢測(cè)有色產(chǎn)物量即可確定樣品中待檢物質(zhì)含量，所以ELISA法是目前我國(guó)各級(jí)醫(yī)院的檢驗(yàn)科用來(lái)預(yù)防、診斷、篩查乙肝的主要技術(shù)手段。 </p><p>　　1.2 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TRFIA） </p><p>　　時(shí)間分辨熒光免疫分析法師在熒光分析（FIA）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種特殊的熒光分析法。也是目前最靈敏的微量分析技術(shù)，其靈敏度高達(dá)10∧(-12)g/ml，較放射免疫分析(RI

9、A)高出3個(gè)數(shù)量級(jí)。它利用了具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系及其螯合物為示蹤物，通過(guò)標(biāo)記多肽、蛋白質(zhì)、抗體、激素、核酸探針、生物活性細(xì)胞，反應(yīng)體系發(fā)生相關(guān)反應(yīng)之后，采用時(shí)間分辨熒光免疫分析儀來(lái)測(cè)定最終產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度，再根據(jù)熒光強(qiáng)度與相對(duì)熒光強(qiáng)度的比值，可判斷反應(yīng)體系中的被測(cè)物濃度，以此完成定量分析。實(shí)際上是在熒光分析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，它是一種特別的熒光分析，它利用了熒光的波長(zhǎng)其激發(fā)波長(zhǎng)的巨大差異客服了普通紫外-可見(jiàn)分光分析法中雜色光的同時(shí)，時(shí)

10、間分辨熒光免疫（TRF）分析法之所以能夠成為一種更新，更靈敏的檢測(cè)方法，主要取決于標(biāo)記稀土離子的獨(dú)特的熒光光譜特性，激發(fā)譜寬，STOKES位移大，熒光壽命長(zhǎng)，通過(guò)采用高靈敏的時(shí)間分辨熒光分辨技術(shù)經(jīng)延時(shí)，門(mén)寬選擇，排除背景熒光的干擾，極大地提高信嗓比。此項(xiàng)分析技術(shù)具有靈敏度高，穩(wěn)定性好，線性范圍寬，標(biāo)記物制備簡(jiǎn)便，有效期長(zhǎng)，不污染環(huán)境，操作簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是取代酶標(biāo)放免的最佳免疫</p><p>　　2 E

11、LISA 與TRFIA檢測(cè)方法的比較 </p><p>　　對(duì)乙肝兩對(duì)半的定量測(cè)定(TRFIA)和定性酶標(biāo)測(cè)定(ELISA)的研究表明，兩種方法對(duì)HBs－Ag,HBs-Ab,HBe-Ag,HBc-Ab的陽(yáng)性檢出率差異不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；TRFIA法的HBe-Ab的陽(yáng)性率差異高于ELISA法，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩者均可滿(mǎn)足對(duì)乙肝兩對(duì)半5項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)要求。ELISA用于預(yù)防性篩查乙肝，可

12、定性檢測(cè)HBV，而TRFIA技術(shù)靈敏度高、穩(wěn)定性好、特異性高、動(dòng)態(tài)范圍寬，用于乙肝患者臨床診斷、觀察療效等方面，可提供動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)指導(dǎo)臨床接種乙肝疫苗，是理想的定量檢測(cè)方法?！耙腋蝺蓪?duì)半”的檢測(cè)結(jié)果意義在于反映機(jī)體感染HBV后免疫應(yīng)答結(jié)果。 </p><p>　　3樣本采集與處理的影響 </p><p>　　3.1標(biāo)本的采集處理可對(duì)ELISA的檢驗(yàn)質(zhì)量產(chǎn)生不同程度的影響 </p&g

13、t;<p>　　標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽(yáng)性，（因此）嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。 </p><p>　　3. 2相關(guān)報(bào)道顯示樣品的存放時(shí)間直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，室溫下保存的血清標(biāo)本</p><p>　　HBsAb從第5天、HBeAg從第7天、HBsAg從第9天開(kāi)始就發(fā)生顯著變化）（p<

14、;0.01）；4～8℃下保存的血清標(biāo)本HBsAb從第7天、HBsAg從第14天開(kāi)始發(fā)生顯著變化（p<0.01），于-80℃低溫保存的血清樣本HBV血清標(biāo)記物可在4個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定保存（p>0.05）；采集的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，可避免因存放過(guò)久的檢驗(yàn)誤差。 </p><p>　　3.3標(biāo)本凝固不全，正常血液采集后1／2~2h開(kāi)始凝固，18~24ｈ完全血塊完全收縮</p><p>　　

15、在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白血塊或附著在酶標(biāo)板孔壁內(nèi)使酶標(biāo)記物不易洗掉，易造成假陽(yáng)（陰）性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?</p><p>　　3.4乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)能提供乙肝病毒標(biāo)志物的精確含量&l

16、t;/p><p>　　這不僅是方法學(xué)上的進(jìn)步，在臨床的使用上也有較大優(yōu)越性。臨床應(yīng)用情況表明，乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)值的高低是診斷乙肝的可靠依據(jù)。資料顯示，血清乙肝病毒血癥水平的增加觸發(fā)了機(jī)體免疫反應(yīng)，結(jié)果導(dǎo)致肝臟損害，表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高。檢測(cè)乙肝病毒含量不僅能較好地反應(yīng)乙肝病毒攜帶者的病毒血清水平和感染強(qiáng)弱程度，對(duì)動(dòng)態(tài)觀察治療前后乙肝病毒含量變化以及評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)療效均有重要意義。因此，乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)的變化對(duì)評(píng)

17、價(jià)和預(yù)測(cè)療效均有意義，是療效觀察的有效指標(biāo)。如伴隨著HBs-Ag的濃度和HBc-Ag濃度的降低，說(shuō)明病情好轉(zhuǎn)，治療有效，特別是HBc-Ag濃度的減少直至消失，是治療效果的最佳體現(xiàn)。乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)較定性檢測(cè)更敏感，在乙肝病毒標(biāo)志物處于低濃度時(shí)，定性檢測(cè)可表現(xiàn)為陰性，而定量檢測(cè)仍可檢出，寫(xiě)在一定程度上減少了漏診率，避免誤診，充分 體現(xiàn)了乙肝兩對(duì)半定量測(cè)定的優(yōu)越性。相對(duì)于乙肝兩對(duì)半定性檢測(cè)而言，乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)能提供乙肝病毒標(biāo)志物的含量

18、，對(duì)治療的轉(zhuǎn)歸判斷有更精細(xì)的指導(dǎo)意義，在臨床的使用上也有較大優(yōu)越性，乙肝兩對(duì)半定量是治療觀察的有效指標(biāo)，為醫(yī)生確定及調(diào)整診效方案提供了科學(xué)有效的臨床依據(jù)。</p><p>　　4操作因素的影響 </p><p>　　乙肝兩對(duì)半ELISA檢驗(yàn)過(guò)程包括加樣、加試劑、孵育、洗板、酶標(biāo)儀、報(bào)結(jié)果等，每一步驟都有可能人為造成檢驗(yàn)結(jié)果偏差，故對(duì)檢驗(yàn)人員的操作技術(shù)要求極高。與ELISA相比較，TRFI

19、A法的操作可避免人為因素造成的檢驗(yàn)干擾，隨著TRFIA儀器及試劑國(guó)產(chǎn)化、檢驗(yàn)費(fèi)用的降低，將利于TRFIA法的臨床推廣。 </p><p>　　5干擾物質(zhì)的影響 </p><p>　　大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果；常見(jiàn)的干擾物質(zhì)：有類(lèi)風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig（s）抗體、嗜靶抗原自身抗體等。干擾物質(zhì)可能造成檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性或假陰性，

20、TRFIA法利用時(shí)間分辨熒光分析儀在激發(fā)后延遲測(cè)量時(shí)間，可有避免非特避免非特異性熒光的干擾，以此提高檢驗(yàn)的特異性。 </p><p>　　乙肝兩對(duì)半的檢驗(yàn)質(zhì)量影響因素還有許多方面，包括儀器設(shè)備的功能及檢修，藥物的影響等，實(shí)際檢測(cè)乙肝兩對(duì)半時(shí)，應(yīng)從多方面排除干擾因素，避免出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，保證檢驗(yàn)質(zhì)量，為臨床提供正確可靠地檢測(cè)結(jié)果。 </p><p><b>　　6.試劑

21、的影響 </b></p><p>　　試劑盒影響及處理方法 在ELISA法實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，試劑盒質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)結(jié)果正確性的基本保證，因各商家的試劑盒特異性、靈敏性、穩(wěn)定性與精密性等存在一定差異，因此，為了避免試劑盒所帶來(lái)的影響，實(shí)驗(yàn)所用的試劑盒應(yīng)均是國(guó)家相關(guān)部門(mén)檢定的合格品，不同廠家生產(chǎn)試劑地特異性和靈敏度地范圍為89.4%~99.3%、78%~89%[3]，數(shù)據(jù)顯示存在很大的差異。對(duì)于商家試劑盒存在的差異性

22、，各實(shí)驗(yàn)室可依據(jù)自身實(shí)際狀況，盡量選擇靈敏性好、特異性強(qiáng)與操作簡(jiǎn)單的試劑盒，并符合相關(guān)部門(mén)的質(zhì)量要求，同時(shí)，試劑盒要保存在2℃-8℃的環(huán)境中，并做好溫度記錄，當(dāng)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)把試劑盒放在室溫中，對(duì)其平衡0.5h，確保反應(yīng)時(shí)間的一致性與準(zhǔn)確性。 </p><p>　　結(jié)論：全面、細(xì)致以及周到的具有綜合性的措施能夠在最大程度上使對(duì)標(biāo)本質(zhì)量產(chǎn)生的影響有所減少，對(duì)影響因素進(jìn)行有效的控制，使檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量得到了一定程度上的提高

23、</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]任建新.時(shí)間分辯熒光免疫法定量檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的效果評(píng)價(jià)（J）.中外醫(yī)療，2010（13）：78。</p><p>　　[2]梁升林、羅凱、廖桂梅，等乙方肝兩對(duì)半檢測(cè)結(jié)果分析評(píng)價(jià)（J）.中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2010（12）：124-125。</p><p>

24、;　　[3]趙遠(yuǎn)懷、向際兵、羅樂(lè)平等乙肝兩對(duì)半檢測(cè)的臨床意義。</p><p>　　[4]尹永貞.1028例乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)結(jié)果分析評(píng)價(jià)（J）.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011.17（15）：73--74。</p><p>　　[5]賀云方.定性酶標(biāo)測(cè)定與定量檢測(cè)對(duì)肝兩對(duì)半結(jié)果的影響評(píng)價(jià)（J）.醫(yī)學(xué)信息：中旬，2011.24（6）：56-57。</p><p>　　河南焦作職工醫(yī)