豬瘟病毒四種不同抗原卵黃抗體中和效力評價.pdf

1、豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一種急性、接觸性傳染病。臨床表現(xiàn)為高熱和全身多發(fā)性小點出血，以內(nèi)臟器官多發(fā)性出血、梗塞和壞死為主要病理特征。該病流行廣泛，發(fā)病率和死亡率高，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。有人曾經(jīng)用干擾素、中草藥制劑來預防及治療豬瘟，但均未取得成功。目前，對該病的預防主要采用免疫接種豬瘟兔化弱毒疫苗，但接種豬瘟疫

2、苗后經(jīng)常出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象，不能對豬瘟進行全面有效的預防。卵黃抗體作為一種高效生物制劑在傳染病的緊急預防中顯示出了明顯的效果，也為該病的緊急預防開辟了新的途徑。
　　 本研究克隆了豬瘟病毒E2基因中抗原指數(shù)較高且含有中和性抗原域的A1/A2區(qū)以及B、C區(qū)中抗原性較高的一段區(qū)域，該區(qū)域位于E2基因上754～880氨基酸殘基位置，命名為tE2，又合成了兩段豬瘟病毒線性中和表位核苷酸序列，表位CKEDYRYAISSTNEIGLLGAG

3、GLT位于E2基因上693～716氨基酸殘基位置，命名為P1，表位QTAVSPTTLRTEVVK位于E2基因上828～842氨基酸殘基位置，命名為P2。利用同尾酶串聯(lián)技術(shù)將P1和P2兩個中和表位分別在克隆載體pUC57上，重復串聯(lián)4次，酶切后連接表達載體在大腸桿菌中表達，分別獲得了具有中和抗原表位的tE2重組蛋白、4P1和4P2串聯(lián)重組蛋白，經(jīng)Western blot鑒定均具有抗原性。將上述3種重組蛋白和豬瘟活疫苗分別用白油佐劑混合乳化

4、，分組免疫9月齡海蘭蛋雞，共進行3次免疫，每次間隔兩周。其中，tE2重組蛋白免疫組的一免劑量為0.50mg/只，二免劑量為1.00mg/只，三免劑量為1.50mg/只；4P1和4P2串聯(lián)重組蛋白免疫組一免劑量均為0.40mg/只，二免劑量為0.60mg/只，三免劑量為0.80mg/只；豬瘟活疫苗免疫組三次免疫的劑量均為10頭份/只。
　　 二免后一周開始收蛋，用氯仿法抽提卵黃抗體，用建立的間接ELISA法檢測抗體效價。以豬瘟活疫

5、苗和tE2重組蛋白作為免疫原獲得的卵黃抗體用tE2重組蛋白作為包被抗原，ELISA效價最高值分別為1:1024和1:4096；以4P1重組蛋白作為免疫原獲得的卵黃抗體用4P1重組蛋白作為包被抗原，ELISA效價最高值為1:4096；以4P2重組蛋白作為免疫原獲得的卵黃抗體用4P2重組蛋白作為包被抗原，ELISA效價最高值為1:1024。體外免疫熒光中和試驗結(jié)果顯示，抗豬瘟活疫苗卵黃抗體、抗tE2重組蛋白卵黃抗體、抗4P1重組蛋白卵黃抗體

6、和抗4P2重組蛋白卵黃抗體均可不同程度中和豬瘟病毒。其中，抗豬瘟活疫苗卵黃抗體和抗4P1重組蛋白卵黃抗體中和作用相對較強，抗體和病毒混合后接種PK-15細胞，培養(yǎng)24h和48h進行免疫熒光試驗均無特異性熒光出現(xiàn)；而抗tE2重組蛋白卵黃抗體和抗4P2重組蛋白卵黃抗體和病毒混合后接入PK-15細胞，在24h和48h進行免疫熒光試驗均有少量特異性熒光出現(xiàn)，但明顯少于陽性接毒對照出現(xiàn)的熒光數(shù)量。兔體中和試驗結(jié)果顯示，抗豬瘟活疫苗卵黃抗體和抗4P