BoLA-I外顯子2、3在親本和子代奶牛中同源性研究.pdf

1、奶牛在人們日常生活中扮演著越來越重要的作用，而奶牛繁殖力低下一直是制約奶牛產業(yè)發(fā)展的一個瓶頸。哺乳動物和人類的妊娠過程是自然界中存在的同種半異體移植免疫耐受的天然模型。
　　 主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)在妊娠維持中起著重要的作用。牛的MHC又稱為牛白細胞抗原(Bovine leucocyte antigen，BoLA)，其基因位于第23號染色體上。按照MHC異

2、源性解釋，雙親BoLA-Ia基因越相似，妊娠排斥越小，而BoLA-Ia又具有高度的多態(tài)性。相反地，BoLA-Ib的表達有利于保護胚胎免受母體免疫侵害，但多態(tài)性不高。按照這一推理，BoLA-Ib在胎兒和母體的差異越小或表達水平越低，排斥得越嚴重。
　　 根據(jù)本實驗室已經得出的部分實驗結果，選取與妊娠相關的一個BoLA-Ia基因(BoLA-A)和一個BoLA-Ib基因(BoLA-NC1)，根據(jù)MHC異源性引起妊娠排斥的相關理論，取正

3、常妊娠母牛PBMC、配種公牛精液和胎兒體細胞，從中提取DNA，設計引物擴增相應的BoLA-I相關基因，比較這兩個基因的外顯子2、3在六組樣本里父本、母本和子代中的同源性，確定其同源性規(guī)律，從而進一步推出其同源性與正常妊娠維持的關系，并探討其對妊娠的可能性影響。
　　 實驗結果發(fā)現(xiàn)，父本、母本、子代同源性差異普遍存在，且與NCBI上公布的相對應的BoLA序列并不完全一致，可見BoLA多態(tài)性明顯，而且其多態(tài)性不僅存在于種間，還存在于

4、種內。從親本與子代同源性數(shù)據(jù)我們可以看出，BoLA-A基因和BoLA-NC1基因更多的是遺傳于父本(58.33%和55.56%)，可見父本這兩個基因對子代的影響力更大。本實驗樣本為正常妊娠的母牛和正常生產的仔牛，雖然其在外顯子2、3上存在一些序列差異，但兩個基因的差異都比較小，根據(jù)實驗結果推測，要維持正常妊娠，BoLA-A親本外顯子2同源性應大于99.75%，外顯子3同源性應大于99.69%；BoLA-NC1親本外顯子2同源性應小于99

5、.57%，外顯子3同源性應小于98.73%，但是由于缺乏由親本同源性差異而引起的非正常妊娠樣本，我們無法推測BoLA-I親本同源性閾值。
　　 在同一樣本組中，BoLA-A與BoLA-NC1的同源性大小有一定差異，但是這種差異并不明顯(P>0.05)。本研究六組樣本中外顯子2、3與NCBI上序列信息對比分析，發(fā)現(xiàn)均存在單核苷酸突變，發(fā)現(xiàn)了BoLA-A外顯子2上有4個突變位點，外顯子3上有4個突變位點；BoLA-NC1外顯子2上有

6、10個突變位點，外顯子3上有11個突變位點。這些突變位點有一部分為同義突變，但大部分都造成了編碼的氨基酸的改變，而且在同組不同樣本中存在相同的突變位點，但是因為樣本數(shù)量有限，以上并不能全面概括BoLA在外顯子2、3上的SNPs。
　　 本研究比較了BoLA-A和BoLA-NC1基因在六組樣本中親本和子代中的同源性，其差異性普遍存在，而且父本這兩個基因對子代的影響力更大；并根據(jù)結果推測出要維持正常妊娠，這兩個基因的同源性范圍；另外