草魚(yú)(Ctenopharyngodon idella)GRP78和抗氧化酶在抵抗溫度、Pb2+脅迫中的功能.pdf

1、草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)是我國(guó)最為重要的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)。由于應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈,常造成養(yǎng)殖過(guò)程中的大量死亡。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(glucose regulatedprotein,GRP)屬于熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)亞家族成員,是一種分布在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中為適應(yīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)所產(chǎn)生的一類(lèi)應(yīng)激蛋白。GRP78是葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白中的重要成員,葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中標(biāo)志性的分子伴侶,參與蛋白質(zhì)折

2、疊、裝配與運(yùn)轉(zhuǎn)。在魚(yú)體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng),包括過(guò)氧化氫酶、過(guò)氧化物酶等有抵抗重金屬毒性的作用,可用于診斷重金屬污染的指標(biāo)。為了解草魚(yú)應(yīng)激反應(yīng)的分子機(jī)理,我們開(kāi)展了草魚(yú)GRP78和抗氧化酶在抵抗溫度、Pb2+脅迫中作用的研究。
　　 1、定量PCR結(jié)果顯示,草魚(yú)GRP78有廣譜的本底組織表達(dá)水平,經(jīng)34℃和4℃短暫誘導(dǎo)后,其表達(dá)水平有一定的上調(diào),主要表現(xiàn)在肝、腎組織最為顯著。受0.25mmol·L-1硝酸鉛處理24 h后,GRP78

3、在各組織表達(dá)水平均有提高,其中肝組織較于其他組織表達(dá)量增多最為明顯。
　　 2、為了解CiGRP78在溫度、Pb2+脅迫反應(yīng)中的功能,我們進(jìn)行了42℃熱激、4℃冷激的細(xì)胞保護(hù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,CiGRP78不僅僅對(duì)原核細(xì)胞有冷、熱保護(hù)作用外,對(duì)小鼠骨髓瘤細(xì)胞和草魚(yú)腎細(xì)胞同樣起到了保護(hù)作用。轉(zhuǎn)染CiGRP78和未轉(zhuǎn)染的CIK細(xì)胞在28℃培養(yǎng)36h內(nèi)存活率沒(méi)有顯著變化,說(shuō)明對(duì)于CIK細(xì)胞,轉(zhuǎn)染載體和目的基因不會(huì)影響其生長(zhǎng)狀態(tài)。三種CI

4、K細(xì)胞在低濃度鉛的情況下,36h以?xún)?nèi)未轉(zhuǎn)染與轉(zhuǎn)染目的基因的CIK細(xì)胞存活率有顯著不同,轉(zhuǎn)染了目的基因的細(xì)胞一直比未轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染載體的細(xì)胞存活率高,在36h時(shí)仍然較高。另外,GRP78對(duì)重金屬應(yīng)激也顯示出對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用。雖然機(jī)制目前并不清楚,但在高濃度鉛脅迫下,24h內(nèi)轉(zhuǎn)染目的基因的細(xì)胞存活率顯著高于其他兩種細(xì)胞,但是36h時(shí)3種細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著性差別。
　　 3、鉛及其化合物是水體中常見(jiàn)的重金屬污染源,會(huì)對(duì)魚(yú)類(lèi)產(chǎn)生巨大的危害。

5、為了研究鉛及其化合物對(duì)草魚(yú)血清的抗氧化能力的影響,本文分別用不同濃度的Pb2+溶液處理草魚(yú),探究草魚(yú)血清中過(guò)氧化氫(H2O2)含量的變化以及與草魚(yú)血清中過(guò)氧化氫酶(CAT)和髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性的關(guān)系。結(jié)果表明,低濃度的Pb2+對(duì)草魚(yú)血清中H2O2具有刺激作用,其含量隨著pb2+濃度的增加而升高,當(dāng)Pb2+濃度為0.25 mmol·L-1時(shí)達(dá)到最高值。與H2O2含量變化相反,草魚(yú)血清中CAT和MPO的活性隨pb2+濃度的增高而降低