河南濮陽地區(qū)雞傳染性法氏囊病病毒的分離鑒定及PY-03株全基因組序列測(cè)定.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(infectiousbursaldisease.IBD)是由傳染性法氏囊病毒(infectiousbursaldiseasevirus.IBDV)引起雞和火雞的一種急性、高度接觸性、病毒性傳染病。本病主要感染3-12周齡的雛雞和青年雞的中樞免疫器官一法氏囊，病毒主要破壞帶有sIgM的B淋巴細(xì)胞，引起脾臟、胸腺及外周血液淋巴細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞衰竭壞死從而引起機(jī)體的免疫抑制，同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體對(duì)其它病原體的易感性和降低對(duì)其

2、它疫苗的反應(yīng)性。近十幾年來，由于傳染性法氏囊病病毒超強(qiáng)毒株(VeryvirulentinfectiousBursalDisease，vvIBDV)和變異毒株的出現(xiàn)，血清亞型的多樣性和抗原變異，使本病的發(fā)生和流行呈現(xiàn)新的特點(diǎn)，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了極大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 本研究從河南濮陽地區(qū)疑似發(fā)病雞場(chǎng)采取15份病雞的法氏囊，通過無菌處理接種9-11日齡SPF雞胚絨毛尿囊膜，制備病毒懸液，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，初步篩選到6份雞傳染性法氏囊病病

3、毒，命名為PY-01、PY-02、PY-03、PY-04、PY-05、PY-06。對(duì)其中4株傳染性法氏囊病病毒進(jìn)行理化特性、EID50等生物學(xué)特性研究。所得PY-01、PY-02、PY-03、PY-04四個(gè)分離株生物學(xué)特性符合傳染性法氏囊病的基本特性，其EID50結(jié)果分別為10-7.51、10-7.60、10-8.5、10-7.68EID50/0.2ml。
　　 為了解PY-03分離株的分子流行特性，在全基因組序列測(cè)定的基礎(chǔ)上，

4、比較分析了與GenBank中登陸的傳染性法氏囊病病毒代表毒株核苷酸及推導(dǎo)氨基酸序列之間的同源性及其系統(tǒng)進(jìn)化地位，并對(duì)多聚蛋白VP2/VP4/VP3基因編碼的氨基酸親水性及抗原表位進(jìn)行了分析。該毒株具有保守的七肽區(qū)SWSARGS，在222位為P、249位為Q、254位為G，說明該分離株抗原性還未發(fā)生變異，不屬于變異株。且在279、222位等位點(diǎn)不具備超強(qiáng)毒的特征。在第222、242、253、279、284位特征性氨基酸分別為P、V、H、N

5、、T，與弱毒疫苗株完全一致。A節(jié)段核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列同源性分析結(jié)果顯示PY-03株與減毒株CEF94、Cu-1、Gt同源性均較高，同源性達(dá)99.5-99.9％，而與超強(qiáng)毒株HK46、UK661、Gx同源性較低。核苷酸的同源性僅為95.6-95.9％。從進(jìn)化關(guān)系看，PY-03株屬于血清Ⅰ型毒株，與減毒株CEF84、變異毒株NB同屬于一個(gè)小支，親緣關(guān)系較近，而與超強(qiáng)毒株HK46、UK661、Gx株，經(jīng)典毒株T09、UPM94/27

6、3親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。然而對(duì)B節(jié)段VPI基因片段核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列做同源性分析，發(fā)現(xiàn)PY-03株與超強(qiáng)毒株UK661同源性最高，與減毒株Cu-1、CEF94、B87、Edgar、Gt的同源性均較低。從系統(tǒng)進(jìn)化樹中也可以看出，其VP1既不屬于超強(qiáng)毒株，也不屬于減毒株，在它們之間形成一個(gè)獨(dú)立的分支；但與除Gx株之外的超強(qiáng)毒株遺傳關(guān)系相對(duì)較近，與減毒株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，推測(cè)PY-03株可能為一重組病毒。這些結(jié)果為河南濮陽地區(qū)傳染性法氏囊病的分